Amplite 熒光法丙酮酸檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測丙酮酸的試劑盒，丙酮酸是細胞內(nèi)代謝途徑中的重要化合物。它來源于稱為糖酵解的葡萄糖代謝。一分子葡萄糖分解成兩個丙酮酸分子，通過兩種方式之一提供活細胞能量。當氧氣存在時（有氧呼吸），丙酮酸被丙酮酸脫氫酶轉(zhuǎn)化為乙酰-CoA，丙酮酸脫氫酶進入檸檬酸循環(huán)（也稱為三羧酸循環(huán)）產(chǎn)生ATP。當氧氣不足時，丙酮酸鹽會厭氧分解，在動物體內(nèi)產(chǎn)生乳酸鹽，在植物和微生物體內(nèi)產(chǎn)生乙醇。丙酮酸鹽的異常水平或乳酸鹽與丙酮酸鹽的濃度比可能與肝臟疾病或代謝紊亂有關(guān)，并且是患者臨床和其他實驗室研究中的一種診斷測量。 AAT Bioquest的Amplite 比色丙酮酸測定試劑盒提供了一種靈敏的比色測定法，用于定量樣品中的丙酮酸。它利用釋放過氧化氫的酶偶聯(lián)反應(yīng)，可通過吸光度酶標儀在575 nm處通過丙酮酸鹽傳感器檢測。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 熒光法丙酮酸檢測試劑盒。

樣品實驗方案

簡要概述

1.準備測試樣品（50 µL）以及連續(xù)稀釋的丙酮酸標準液（50 µL）
2.加入等體積的丙酮酸工作溶液（50 µL）
3.在室溫下孵育30分鐘至1小時
4.監(jiān)測Ex / Em = 540/590 nm的熒光強度

溶液制備

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復凍融循環(huán)。
1.1 Quest Fluor 丙酮酸傳感器儲備溶液（200X）：
將55 µL DMSO（組分E）添加到Quest Fluor 丙酮酸傳感器（組分A）中，制成200X Quest Fluor 丙酮酸傳感器儲備溶液。

1.2 丙酮酸標準溶液（1 mM）：
將10 µL 100 mM丙酮酸鹽（組分D）添加到990 µL PBS（pH 7）中，得到1 mM丙酮酸鹽溶液。

2.標準溶液

丙酮酸標準
將100 µL的1 mM丙酮酸標準溶液加入900 µL PBS中制成100 µM丙酮酸溶液（PS7）。 然后執(zhí)行1：3連續(xù)稀釋以獲得連續(xù)稀釋的丙酮酸標準品（PS6-PS1）。

3.工作溶液

3.1 將5 mL測定緩沖液（組分C）加入一瓶酶混合1瓶（組分B1）中； 混合均勻。

3.2 將100μLddH2O加入一個酶混合物2小瓶（組分B2）中； 混合均勻。

3.3 將整個小瓶（100μL）的Enzyme Mix 2和25 uL的200X Quest Fluor 丙酮酸傳感器儲備溶液轉(zhuǎn)移到Enzyme Mix 1瓶中。 混合均勻。 注意：丙酮酸工作溶液不穩(wěn)定，應(yīng)立即使用，避免光照。