Amplite 熒光法fu酶A定量試劑盒   綠色熒光是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)輔*的試劑盒，輔*A（CoA）是所有形式的細(xì)胞生命中的通用和必需的輔因子，在許多生物合成，能量產(chǎn)生和降解途徑中充當(dāng)主要的酰基載體。它在脂肪酸，丙酮酸氧化和檸檬酸循環(huán)的合成和氧化中起重要作用。 CoA的測(cè)量是研究許多生物系統(tǒng)中的生物過程和事件的基本任務(wù)之一。有一些試劑或檢測(cè)試劑盒可用于定量生物系統(tǒng)中的CoA含量?，F(xiàn)有的商業(yè)套件要么缺乏靈敏度，要么程序繁瑣。我們的Amplite 熒光CoA 定量分析試劑盒提供超靈敏熒光測(cè)定法，通過檢測(cè)CoA中的-SH基團(tuán)來定量CoA含量。我們?cè)谠撛噭┖兄惺褂玫膶Ｓ袩晒釩oA Green 染料在與-SH反應(yīng)后變?yōu)閺?qiáng)熒光。該測(cè)定試劑盒可在100μL測(cè)定體積（40nM）中檢測(cè)少至4皮摩爾的CoA。它可以在方便的96孔或384孔微量滴定板格式下以Ex / Em = 490 / 520nm進(jìn)行，并且無需分離步驟即可輕松適應(yīng)自動(dòng)化。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 熒光法fu酶A定量試劑盒   綠色熒光。

實(shí)驗(yàn)方案

96孔板檢測(cè)示例

概述

準(zhǔn)備CoA測(cè)定混合物（50μL）

添加CoA標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50μL）

在室溫下孵育10分鐘 -  1小時(shí)

監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490/520 nm處的熒光增加

注意：在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分

操作步驟

1.準(zhǔn)備CoA標(biāo)準(zhǔn)庫存解決方案：

將200μlddH2O加入CoA標(biāo)準(zhǔn)小瓶（組分C）中以制備1mM（1nmol / L）儲(chǔ)備溶液。

注意1：強(qiáng)烈建議使用已用氮?dú)鈬娚涞膁dH2O去除氧氣，以制備輔*A原液。

注意2：水溶液不穩(wěn)定，會(huì)迅速降解。 應(yīng)儲(chǔ)存在2-8℃，并在1天內(nèi)使用。

2.準(zhǔn)備100X CoA Green 原液：

將100μLDMSO（組分D）加入到小瓶CoA Green （組分A）中以制備100X儲(chǔ)備溶液。

注意：未使用的CoA Green 原液應(yīng)分成一次性使用的等分試樣，保存在-20℃并避光。

3.準(zhǔn)備CoA Assay混合物：

將50L 100X CoA Green 儲(chǔ)備溶液（來自步驟2）加入5mL測(cè)定緩沖液（組分B）中，并充分混合。

4.準(zhǔn)備CoA標(biāo)準(zhǔn)品的連續(xù)稀釋液（0至30μM）：

4.1將30μLCoA標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（來自步驟1）加入970L測(cè)定緩沖液（組分B）中以產(chǎn)生30μM（30pmol / L）CoA標(biāo)準(zhǔn)品。

注意：稀釋的CoA標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

4.2取200μL30μMCoA標(biāo)準(zhǔn)溶液，用Assay緩沖液（組分B）進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到10,3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μM連續(xù)稀釋的CoA標(biāo)準(zhǔn)品。

4.3將CoA標(biāo)準(zhǔn)品和含CoA的測(cè)試樣品加入到實(shí)心黑色96孔微孔板中，如說明書中的表1和2所示。

注意：根據(jù)需要處理細(xì)胞或組織樣本。

5.運(yùn)行CoA測(cè)定：

5.1將50μLCoA反應(yīng)混合物（來自步驟3.1）添加至CoA標(biāo)準(zhǔn)品的每個(gè)孔，空白對(duì)照和測(cè)試樣品（參見步驟4.3），以使總CoA測(cè)定體積為100μL/孔。

注意：對(duì)于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μLCoA反應(yīng)混合物。

5.2在室溫下孵育反應(yīng)10分鐘至1小時(shí)，避光。

5.3用熒光板讀數(shù)器監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490 / 520nm處的熒光增加