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當(dāng)前位置:西安百螢生物科技有限公司>>DNA檢測>> 15276Amplite NADP+/NADPH檢測試劑盒

Amplite NADP+/NADPH檢測試劑盒

參  考  價(jià)面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號15276

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)代理商

所  在  地西安市

更新時(shí)間:2024-01-30 07:47:54瀏覽次數(shù):138次

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Amplite NADP+/NADPH檢測試劑盒(比色法)增強(qiáng)靈敏度是美國AAT Bioquest研發(fā)的檢測總NADP和NADPH的試劑盒,煙X胺腺嘌呤二核苷酸(NAD +)和煙X胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP +)是細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的兩種重要的輔因子。

Amplite NADP+/NADPH檢測試劑盒 增強(qiáng)靈敏度是美國AAT Bioquest研發(fā)的檢測總NADP和NADPH的試劑盒,煙X胺腺嘌呤二核苷酸(NAD +)和煙X胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP +)是細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的兩種重要的輔因子。 NADH是NAD +的還原形式。 NAD形成NADP,通過酯鍵將磷酸基團(tuán)添加到腺苷核苷酸的2'位置。傳統(tǒng)的NAD / NADH和NADP / NADPH測定基于監(jiān)測340nm處NADH或NADPH吸收的變化。 NAD / NADH和NADP / NADPH測定的短紫外波長使得傳統(tǒng)方法具有低靈敏度和高干擾。 AAT Bioquest的Amplite™比色總NADP / NADPH檢測試劑盒為檢測總NADP和NADPH提供了一種便捷的方法。系統(tǒng)中的酶特異性識別酶循環(huán)反應(yīng)中的NADP / NADPH。無需從樣品混合物中純化NADP / NADPH。酶循環(huán)反應(yīng)顯著提高了檢測靈敏度。 NADPH探針是一種生色傳感器,在NADP減少時(shí)具有460nm的大吸光度。 NADPH探針的吸收與溶液中NADPH的濃度成正比。 Amplite™比色總NADP和NADPH分析試劑盒提供靈敏的分析,可在100μL分析體積中檢測低至0.03μM的總NADP / NADPH。與試劑盒#15260相比,該試劑盒具有更高的靈敏度。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite NADP+/NADPH檢測試劑盒 。

實(shí)驗(yàn)方案

96孔板檢測示例

概述

準(zhǔn)備NADP / NADPH反應(yīng)混合物(50μL)

加入NADPH標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品(50μL)

在室溫下孵育15分鐘至2小時(shí)

監(jiān)測460nm處的吸光度

注意:在開始實(shí)驗(yàn)之前,在室溫下解凍每個試劑盒組分中的一個。

操作步驟

1.準(zhǔn)備NADPH原液:

將200μLPBS緩沖液加入到NADPH標(biāo)準(zhǔn)品(組分C)的小瓶中以制備1mM(1nmol / L)NADPH儲備溶液。

注意:未使用的NADPH原液應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲存在-20℃。

2.制備NADP / NADPH反應(yīng)混合物:

2.1將8mL NADPH探針緩沖液(組分B-II)加入到NADP / NADPH回收酶混合物(組分A)的瓶中,并充分混合。

2.2將2 mL NADPH探針(組分B-I)加入上述瓶中(來自步驟2.1)并充分混合。

注意:這種NADP / NADPH反應(yīng)混合物足以進(jìn)行200次分析。未使用的NADP / NADPH反應(yīng)混合物應(yīng)分成一次性等分試樣并儲存在-20℃。

3.準(zhǔn)備NADPH標(biāo)準(zhǔn)品的連續(xù)稀釋液(0至2μM):

3.1將2L 1mM NADPH儲備溶液(來自步驟1)加入998L PBS緩沖液(pH7.4)中,產(chǎn)生2M(2 pmols / L)NADPH標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意:稀釋的NADPH標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定,應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

3.2取200μL2MNADPH標(biāo)準(zhǔn)溶液(來自步驟3.1)進(jìn)行1:2連續(xù)稀釋,得到1,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0313和0M系列稀釋的NADPH標(biāo)準(zhǔn)品。

3.3如表1和2中所述,將含有NADPH標(biāo)準(zhǔn)品和含NADP / NADPH的測試樣品的系列稀釋液加入白色/透明底96孔微量培養(yǎng)板中。

注意:根據(jù)需要準(zhǔn)備細(xì)胞或組織樣本。為方便起見,裂解緩沖液(組分D)可用于裂解細(xì)胞。 (詳見附錄)。


表1:白色/透明底96孔微孔板中NADPH標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局

BL

BL

TS

TS

NS1

NS1

….

….

NS2

NS2



NS3

NS3



NS4

NS4



NS5

NS5



NS6

NS6



NS7

NS7



注意:NS = NADPH標(biāo)準(zhǔn),BL =空白對照,TS =測試樣品


表2:每個孔的試劑組成

NADPH Standard

Blank Control

Test Sample

Serial Dilutions*: 50 μL

PBS: 50 μL

50 μL

*注意:將連續(xù)稀釋的NADPH標(biāo)準(zhǔn)品(0.0313μM至2μM)加入NS1至NS7的孔中,一式兩份。 高濃度的NADPH(例如,>30μM,終濃度)將導(dǎo)致飽和信號并使校準(zhǔn)曲線非線性。


4.在上清液反應(yīng)中運(yùn)行NADPH測定:

4.1將50μL的NADP / NADPH反應(yīng)混合物(來自步驟2.2)加入NADPH標(biāo)準(zhǔn)品,空白對照和測試樣品的每個孔中(參見步驟3.3),使總NADP / NADPH測定體積為100μL/孔

注意1:對于384孔板,每孔加入25μL樣品和25μLNADP/ NADPH反應(yīng)混合物。

注意2:根據(jù)需要準(zhǔn)備細(xì)胞或組織樣本。 為方便起見,裂解緩沖液(組分D)可用于裂解細(xì)胞。 (詳見附錄)。

4.2在室溫下孵育反應(yīng)15分鐘至2小時(shí),避光。

4.3用吸光度讀板儀在460 nm處檢測吸光度的增加。




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