胞內(nèi)NADH / NADPH熒光成像分析試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測NADH/NADPH的試劑盒，細(xì)胞內(nèi)二氫煙xian胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的檢測對(duì)于疾病診斷和發(fā)現(xiàn)是重要的。通常，氧化還原偶聯(lián)NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代謝，糖酵解，三羧酸循環(huán)和線粒體呼吸中起關(guān)鍵作用。細(xì)胞中NAD（P）H水平的增加與細(xì)胞內(nèi)的相關(guān)的活性氧（ROS）的異常產(chǎn)生和DNA損傷。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探針，在生物系統(tǒng)中檢測細(xì)胞內(nèi)NAD（P）H具有挑戰(zhàn)性。 Cell Meter™細(xì)胞內(nèi)NADH / NADPH熒光成像試劑盒提供了監(jiān)測活細(xì)胞中細(xì)胞內(nèi)NAD（P）H水平的有效方法。 JZL1707 NAD（P）H傳感器是一種的熒光探針，用于檢測和成像細(xì)胞中的NADH / NADPH。探針結(jié)合NADH / NADPH以產(chǎn)生具有高靈敏度和特異性的強(qiáng)熒光信號(hào)。 JZL1707 NAD（P）H傳感器可以很容易地加載到活細(xì)胞中，使用Cy3®或TRITC過濾器可以方便地監(jiān)測其熒光信號(hào)。該試劑盒針對(duì)熒光成像和酶標(biāo)儀應(yīng)用進(jìn)行了優(yōu)化。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的胞內(nèi)NADH / NADPH熒光成像分析試劑盒。

實(shí)驗(yàn)示例

概述

1.在生長培養(yǎng)基中制備細(xì)胞

2.將細(xì)胞與測試化合物和JZL1707 NAD（P）H傳感器工作溶液在37oC孵育30-60分鐘

3.將細(xì)胞洗凈并保持在測定緩沖液中

4.在Ex / Em = 540/590 nm（截止波長= 570 nm）或使用TRITC濾光片的熒光顯微鏡下監(jiān)測熒光強(qiáng)度（底部讀取模式）

操作步驟

1.刺激NADP / NADPH，用10μL10X試驗(yàn)化合物（96孔板）或5μL5X試驗(yàn)化合物（384孔板）在無血清培養(yǎng)基或所需緩沖液（如PBS或HHBS）中處理細(xì)胞）。 對(duì)于對(duì)照孔（未處理的細(xì)胞），加入相應(yīng)量的培養(yǎng)基或化合物緩沖液。

注意：JZL1707 NAD（P）H傳感器對(duì)血清敏感，因此建議將細(xì)胞保存在無血清培養(yǎng)基或您選擇的緩沖液中?；蛘撸梢栽诔Ｒ?guī)的全培養(yǎng)基中制備和處理細(xì)胞。 與JZL1707 NAD（P）H傳感器一起孵育時(shí)，更換為您選擇的無血清培養(yǎng)基或緩沖液。

2.在細(xì)胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的JZL1707 NAD（P）H傳感器工作溶液。 將細(xì)胞與測試化合物和JZL1707 NAD（P）H傳感器工作溶液在37oC共孵育30-60分鐘，避光。

注意：對(duì)于NADH / NADPH陽性對(duì)照處理：將HeLa細(xì)胞與100μMNADH或NADPH在無血清培養(yǎng)基中孵育30分鐘，并與JZL1707 NAD（P）H傳感器工作溶液在37℃下共孵育30分鐘。 

3.用所需緩沖液洗滌細(xì)胞一次。 移除每個(gè)孔中的溶液，并添加100μL/孔的測定緩沖液（組分B）用于96孔板或25μL/孔用于384孔板。

4.使用具有底部讀取模式的Ex / Em = 540 / 590nm（截止= 570nm）的酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光增加，或使用熒光顯微鏡和Cy3過濾器或TRITC過濾器組拍攝圖像。