細胞內(nèi)NADH / NADPH熒光成像試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測NADH/NADPH的試劑盒，細胞內(nèi)二氫煙*胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的檢測對于疾病診斷和發(fā)現(xiàn)是重要的。通常，氧化還原偶聯(lián)NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代謝，糖酵解，三羧酸循環(huán)和線粒體呼吸中起關(guān)鍵作用。細胞中NAD（P）H水平的增加與活性氧（ROS）和DNA損傷的異常產(chǎn)生有關(guān)。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探針，在生物系統(tǒng)中檢測細胞內(nèi)NAD（P）H具有挑戰(zhàn)性。GAI試劑盒提供了監(jiān)測遠光譜中活細胞中細胞內(nèi)NAD（P）H水平的有效方法，并且可以與其他應(yīng)用如GFP表達細胞或MitoTracker的應(yīng)用相結(jié)合。 JJ1902 NAD（P）H是一種的熒光探針，用于檢測和成像細胞中的NADH / NADPH。該熒光探針結(jié)合NADH / NADPH，產(chǎn)生高靈敏度和特異性的強熒光信號。 JJ1902 NAD（P）H傳感器可以很容易地加載到活細胞中，使用Cy5®過濾器可以方便地監(jiān)測其熒光信號。該試劑盒針對熒光成像和酶標(biāo)儀應(yīng)用進行了優(yōu)化。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的細胞內(nèi)NADH / NADPH熒光成像試劑盒。

實驗樣品示例

概述

1.在生長培養(yǎng)基中制備細胞

2.將細胞與測試化合物和JJ1902 NAD（P）H傳感器工作溶液在37℃孵育20  -  30分鐘

3.將細胞洗凈并保持在測定緩沖液中

4.在Ex / Em = 590/655 nm（截止= 610 nm）或使用Cy5®過濾器的熒光顯微鏡下監(jiān)測熒光強度（底部讀取模式）

注意：在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。

操作方法

1.制備工作溶液

將10μL JJ1902 NAD（P）H探針儲備溶液（組分A）加入2.5mL測定緩沖液（組分B）中，并充分混合。該JZL1707 NAD（P）H探針工作溶液在室溫下1小時內(nèi)穩(wěn)定。

注意：40μL的JZL1707 NAD（P）H傳感器原液足以用于一個板

2.實驗步驟

①刺激NADP / NADPH，用10μL10X試驗化合物（96孔板）或5μL5X試驗化合物（384孔板）在無血清培養(yǎng)基或所需緩沖液（如PBS或HHBS）中處理細胞。 對于對照孔（未處理的細胞），加入相應(yīng)量的培養(yǎng)基或化合物緩沖液。

注意：JJ1902 NAD（P）H探針在血清存在的情況下也是兼容的。探針的條件優(yōu)化是強烈推薦的細胞系到細胞系。

②在細胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的JJ1902 NAD（P）H探針工作溶液。將細胞與測試化合物和JJ1902 NAD（P）H探針工作溶液在37℃共孵育20-30分鐘，避光。

注意：對于NADH / NADPH陽性對照處理：將HeLa細胞與100μMNADH或NADPH在無血清培養(yǎng)基中孵育30分鐘，并與JJ1902 NAD（P）H探針工作溶液在37℃下共培養(yǎng)30分鐘。

③用所需緩沖液洗滌細胞一次。移除每個孔中的溶液，并添加100μL/孔的測定緩沖液（組分B）用于96孔板或25μL/孔用于384孔板。

④使用底板讀取模式在Ex / Em = 590 / 655nm（截止= 610 nm）下使用酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光增加，或使用熒光顯微鏡和Cy5®過濾器過濾器獲取圖像。