Amplite 熒光法乙酰膽jian酯酶檢測(cè)試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于乙酰*堿酯酶的試劑盒,乙酰8堿酯酶，也就是大家熟知的AChE。它是一種酶，降解（通過其水解活性）神經(jīng)遞質(zhì)乙酰*堿，產(chǎn)生*堿和乙酸基團(tuán)。它主要被發(fā)現(xiàn)在功能性神經(jīng)肌肉和在神經(jīng)系統(tǒng)的*堿突觸中，在此，它服務(wù)于終端突觸傳遞。AChE具有很高的催化活性，每個(gè)AChE分子每秒能降解5000個(gè)分子的乙酰*堿。乙酰*堿酯酶也在紅血細(xì)胞膜上被發(fā)現(xiàn)，組成Yt血抗原基團(tuán)。乙酰*堿酯酶存在多種分子形式，不同的形式具有類似的催化活性，但是他們之間的組裝過程以及與細(xì)胞表面的黏附存在差異。Amplite 熒光法乙酰*堿酯酶檢測(cè)試劑盒 *綠色熒光* 為檢測(cè)AChE活性提供了一種靈敏的方法。本試劑盒使用我們的Thiolite Green來對(duì)AChE水解乙酰*堿形成的硫醇*堿進(jìn)行定量檢測(cè)，Thiolite Green的綠色熒光強(qiáng)度與形成的硫醇*堿成比例關(guān)系，因此可以反應(yīng)AChE的活性。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 熒光法乙酰膽jian酯酶檢測(cè)試劑盒 。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1.準(zhǔn)備AChE工作溶液（50μL）
2.添加AChE標(biāo)準(zhǔn)品和/或AChE測(cè)試樣品（50μL）
3.在室溫下孵育10-30分鐘
4.監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490 / 520nm處的熒光強(qiáng)度

溶液制備

1.儲(chǔ)備溶液

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 Thiolite Green原液（200X）：
將50μLDMSO（組分E）加入到Thiolite Green（組分A）的小瓶中以制備200X Thiolite Green原液。

1.2 乙酰硫代*堿原液（500X）：
將0.6mL ddH2O加入乙酰硫代*堿（組分C）的小瓶中。

1.3 乙酰*堿酯酶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：
將100μL含0.1％BSA的ddH2O加入到乙酰*堿酯酶標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）的小瓶中，制成50U / mL乙酰*堿酯酶標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

乙酰*堿酯酶標(biāo)準(zhǔn)
將20μL的50U / mL乙酰*堿酯酶標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到980μL測(cè)定緩沖液（組分C）中以產(chǎn)生1000mU / mL乙酰*堿酯酶標(biāo)準(zhǔn)溶液。 取1000 mU / mL乙酰*堿酯酶標(biāo)準(zhǔn)溶液以1:10進(jìn)行，得到100 mU / mL乙酰*堿酯酶標(biāo)準(zhǔn)溶液（AS7）。然后進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋以獲得剩余的連續(xù)稀釋的乙酰*堿酯酶標(biāo)準(zhǔn)品（AS6-AS1）。 注意：稀釋的乙酰*堿酯酶標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

3.工作溶液

將10μL乙酰硫代*堿儲(chǔ)備溶液（500X）和25μLThiolite Green儲(chǔ)備溶液（200X）加入5mL測(cè)定緩沖液（組分B）中，使總體積為5.03mL乙酰*堿酯酶（AChE）工作溶液。 注意：AChE不穩(wěn)定，需要在30分鐘內(nèi)使用，避光。