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PhosphoWorks 熒光法焦磷酸檢測(cè)試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)焦磷酸的試劑盒，焦磷酸鹽（PPi）通過(guò)許多生化反應(yīng)產(chǎn)生，例如ATP水解，DNA和RNA聚合，腺苷酸環(huán)化酶形成的環(huán)AMP和脂肪酸的酶促活化以形成它們的*酯。我們的PhosphoWroks 焦磷酸鹽檢測(cè)試劑盒提供了大的分光光度法測(cè)量焦磷酸鹽。該試劑盒使用我們專(zhuān)有的熒光焦磷酸鹽，其熒光強(qiáng)度成比例地取決于焦磷酸鹽的濃度。我們的測(cè)定法比酶偶聯(lián)焦磷酸鹽方法更容易和更穩(wěn)健，這些方法需要至少兩種酶用于焦磷酸鹽檢測(cè)。該試劑盒提供了測(cè)定焦磷酸鹽的所有必需成分。該試劑盒已成功用于高通量篩選（HTS）。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的PhosphoWorks 熒光法焦磷酸檢測(cè)試劑盒。

操作步驟

簡(jiǎn)要概述

準(zhǔn)備焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品和/或測(cè)試樣品（50μL）
加入焦磷酸鹽工作溶液（50μL）
在室溫下孵育10至30分鐘
監(jiān)測(cè)Ex / Em = 316/456 nm處的熒光強(qiáng)度（截止= 420 nm）

溶液制備

1.制備儲(chǔ)存溶液

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 PPi探針儲(chǔ)備溶液（200X）：
將50μLDMSO（組分D）加入到PPi探針（組分B）的小瓶中以制備200X PPi探針儲(chǔ)備溶液。避光。注意：對(duì)于一個(gè)96孔板，25μLPPi探針儲(chǔ)備溶液就足夠了。

1.2焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 mM）：
將10μL50mM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（組分C）加入490μLddH2 O或50mM Hepes緩沖液（pH 7）中，制成1mM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.制備標(biāo)準(zhǔn)溶液

焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液制備
將50μL的1mM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到450μLDdH2O或50mM Hepes緩沖液中，得到100μM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液（PS7）。取100μM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液，在ddH2O或50mM Hepes緩沖液中進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋?zhuān)玫竭B續(xù)稀釋的焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（PS6-PS1）。

3.制備工作溶液

將25μL的200X PPi Sensor儲(chǔ)備溶液加入到5 mL的分析緩沖液（組分A）中并充分混合以制備PPi工作溶液。注意：由于該檢測(cè)方法對(duì)PPi具有高靈敏度，因此使用不含PPi的實(shí)驗(yàn)室器具和試劑非常重要。 DTT≥1mM會(huì)增加背景，MgCl2≥2mM會(huì)降低反應(yīng)。