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熒光法焦磷酸檢測(cè)試劑盒 離子交換樹(shù)脂是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)焦磷酸的試劑盒，焦磷酸鹽（PPi）通過(guò)許多生化反應(yīng)產(chǎn)生，例如ATP水解，DNA和RNA聚合，腺苷酸環(huán)化酶形成的環(huán)AMP和脂肪酸的酶促活化以形成它們的*酯。我們的PhosphoWroks 焦磷酸鹽檢測(cè)試劑盒提供了大的分光光度法測(cè)量焦磷酸鹽。該試劑盒使用我們專有的熒光焦磷酸鹽，其熒光強(qiáng)度成比例地取決于焦磷酸鹽的濃度。與磷酸鹽和ATP相比，該試劑盒中使用的PPi探針對(duì)PPi具有相當(dāng)高的選擇性。我們的測(cè)定法比酶偶聯(lián)焦磷酸鹽方法更容易和更穩(wěn)健，這些方法需要至少兩種酶用于焦磷酸鹽檢測(cè)。該試劑盒提供了測(cè)定焦磷酸鹽的所有必需成分。該試劑盒已成功用于高通量篩選（HTS）。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的熒光法焦磷酸檢測(cè)試劑盒 離子交換樹(shù)脂。

操作步驟

簡(jiǎn)要概述

準(zhǔn)備PPi探針工作溶液（50μL）
添加焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品和/或測(cè)試樣品（50μL）
在室溫下孵育10至30分鐘
檢測(cè)Ex / Em = 370/470 nm處的熒光強(qiáng)度（cutoff= 455 nm）

溶液制備

1.制備儲(chǔ)備溶液

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 PPi探針儲(chǔ)備溶液（200X）：
將50μLDMSO（組分D）加入到PPi探針（組分B）的小瓶中以制備200X PPi探針儲(chǔ)備溶液。注意：對(duì)于一個(gè)96孔板，25μLPPiSensor儲(chǔ)備溶液就足夠了。

2.制備標(biāo)準(zhǔn)溶液

焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)
通過(guò)將10μL50mM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（組分C）加入490μL測(cè)定緩沖液（組分A）或您選擇的緩沖液（優(yōu)選50 mM Hepes緩沖液，pH 7）中制備1 mM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品，制成1 mM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品。取1 mM焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（PS7）進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到連續(xù)稀釋的焦磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（PS6-PS1）和測(cè)定緩沖液（組分A）。

3.制備工作溶液

將25μL200XPPi Sensor儲(chǔ)備溶液加入5 mL分析緩沖液（組分A）中，并充分混合。注意：由于該檢測(cè)方法對(duì)PPi具有高靈敏度，因此使用不含PPi的實(shí)驗(yàn)室器具和試劑非常重要。注意：DTT（1 uM）會(huì)增加背景，MgCl2≥2mM會(huì)降低反應(yīng)。