樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

準(zhǔn)備乙醇工作溶液（50μL）
添加乙醇標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50μL）
在室溫下孵育5-30分鐘
監(jiān)測(cè)Ex / Em = 540/590 nm處的熒光強(qiáng)度（截止= 570 nm）

溶液制備

1.儲(chǔ)備溶液配制

       除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1. 1Amplite 乙醇試劑原液（250X）：
將40μLDMSO（組分D）加入到Amplite 乙醇試劑（組分A）的小瓶中以制備250X Amplite 乙醇試劑儲(chǔ)備溶液。 應(yīng)立即使用原液。 注意：Amplite 乙醇試劑在硫醇如二硫蘇糖醇（DTT）和2-巰基*醇存在下不穩(wěn)定。 反應(yīng)中DTT或2-巰基*醇的濃度應(yīng)不高于10μM。 Amplite 乙醇試劑在高pH（> 8.5）下也不穩(wěn)定。 因此，反應(yīng)應(yīng)在pH 7-8下進(jìn)行。推薦提供的測(cè)定緩沖液（pH 7.4）。

1.2乙醇酶混合物（100X）：
將100μL測(cè)定緩沖液（組分B）加入到乙醇酶混合物（組分C）的小瓶中并充分混合以制備100X乙醇酶混合物。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

2.1乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
通過(guò)將適量的100％乙醇標(biāo)準(zhǔn)品（組分E）稀釋到H 2 O中來(lái)制備乙醇標(biāo)準(zhǔn)品，以產(chǎn)生0％至0.1％的乙醇濃度。 包含0％乙醇對(duì)照作為空白對(duì)照。 乙醇濃度應(yīng)低兩倍（即0％至0.05％）。

3.工作溶液配制

將20μL250XAmplite 乙醇試劑儲(chǔ)備溶液和50μL100X乙醇酶混合物加入5mL分析緩沖液（組分B）中以制備乙醇工作溶液。