樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1. 準(zhǔn)備并添加膽jian標(biāo)準(zhǔn)品和/或測試樣品（50 µL）

2. 準(zhǔn)備并添加膽jian測定工作溶液（50 µL）

3. 在室溫下孵育15-60分鐘

4. 檢測Ex / Em = 540/590nm時(shí)的熒光強(qiáng)度

溶液配制

儲備溶液配制

1. Amplite Red儲備液（250X）：將40 µL DMSO（組分E）添加到Amplite Red底物（組分A）的小瓶中，應(yīng)立即使用儲備溶液。應(yīng)將所有剩余的溶液等分，并在-20oC重新冷凍。注意1：避免重復(fù)凍融循環(huán)。注意2：在存在硫醇（例如二硫蘇糖醇（DTT）和2-巰J乙醇）的情況下，Amplite Red底物不穩(wěn)定。反應(yīng)中DTT或2-巰J乙醇的終濃度應(yīng)不高于10 µM。Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不穩(wěn)定。因此，反應(yīng)應(yīng)在pH 7-8下進(jìn)行。建議使用提供的測定緩沖液（pH 7.4）。

2.膽jian標(biāo)準(zhǔn)儲備液（50 mM）：將400 µL ddH2O加入膽jian標(biāo)準(zhǔn)液（組分C）的小瓶中，并充分混合。注意：未使用的膽jian儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在-20oC下儲存。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

將20 µL膽jian標(biāo)準(zhǔn)儲備液（50mM）加到980 µL分析緩沖液（組分D）中，生成1000 µM標(biāo)準(zhǔn)溶液。注意：  稀釋的膽jian標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。將30 µL的1000 µM標(biāo)準(zhǔn)溶液加到970 µL的測定緩沖液（組分D）中以生成30 µM膽jian標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后進(jìn)行1：3系列稀釋，以得到10、3、1、0.3、0.1、0.03和0 µM膽jian標(biāo)準(zhǔn)。

工作溶液配制

膽jian測定工作溶液：
將5 mL測定緩沖液（組分D）添加到膽jian探針瓶（組分B）中，并充分混合。在膽jian探針中加入20 µL Amplite Red 儲備溶液（250X）。