樣品實驗方案

簡要概述

1. 用測試化合物制備細(xì)胞（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）

2. 加入等體積的Caspase 3/7底物工作溶液

3. 在室溫下孵育1小時

4. 檢測Ex / Em = 350/450 nm（截止= 420 nm）的熒光強(qiáng)度

溶液配制

工作溶液配制

將50 µL Caspase 3/7底物（組分A）添加到10 mL的測定緩沖液（組分B）中，并充分混合以制成Caspase 3/7底物工作溶液。 注意：將未使用的組分A和B分裝并存儲在-20℃下。 避免重復(fù)凍結(jié)/解凍循環(huán)。

實驗步驟

1. 通過向PBS或所需的緩沖液中加入10 µL /孔的10X測試化合物（96孔板）或5 µL /孔的5X測試化合物（384孔板）來處理細(xì)胞。對于空白孔（不含細(xì)胞的培養(yǎng)基），添加相同量的化合物緩沖液。

2. 將細(xì)胞板在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育（對于喜S堿處理過的Jurkat細(xì)胞，需要4-6小時）以誘導(dǎo)凋亡。

3. 加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Caspase 3/7底物工作溶液。

4. 在避光的條件下，在室溫下孵育平板至少1小時。注意：如果需要，在室溫下添加Caspase 3/7工作溶液之10分鐘，向選定樣品中添加1 µL 1 mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制劑，以確認(rèn)對caspase 3 / 7-like的抑制活動。

5. 以800 rpm的速度離心細(xì)胞板（特別是非粘附細(xì)胞）2分鐘（制動）。

6. 使用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 350/450 nm（截止= 420 nm）處檢測熒光強(qiáng)度。