樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1. 準(zhǔn)備細(xì)胞

2. 添加測試化合物

3. 添加MitoTell Red工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）

4. 將板在5％CO2、37°C的培養(yǎng)箱中孵育30分鐘

5. 添加測定緩沖液B（50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板）

6. 在Ex / Em = 610/650 nm（截止= 630 nm）或使用Cy5濾光片的熒光顯微鏡下檢測熒光增加（底部讀取模式）

溶液配制

將50 µL的200X MitoTell Red（組分A）添加到10 mL的測定緩沖液A（組分B）中，并充分混合以制成MitoTell Red工作溶液，避光。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.用測試化合物處理細(xì)胞一段時(shí)間，以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并建立平行對(duì)照實(shí)驗(yàn)。注意：我們用20 µM CCCP處理HeLa細(xì)胞15分鐘，以改變線粒體膜電位。CCCP或FCCP可以與MitoTell Red同時(shí)添加。為了獲得結(jié)果，可能需要為每個(gè)單獨(dú)的細(xì)胞系滴定CCCP或FCCP。

2.將100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板的MitoTell Red工作溶液加入細(xì)胞板。

3.在避光的條件下，將板在37oC下孵育15-30分鐘。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所用的單個(gè)細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。

4.將50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板的測定緩沖液B（組分C）添加到細(xì)胞板中。注意：加載后請勿洗滌細(xì)胞。對(duì)于非貼壁細(xì)胞，建議在加入測定緩沖液B（組分C）后，以800 rpm離心細(xì)胞板2分鐘，然后制動(dòng)。

5.加入測定緩沖液B（組分C）后10到30分鐘，用熒光酶標(biāo)儀（Ext / Em = 610/650 nm（截止= 630 nm））檢測熒光強(qiáng)度，或在熒光下用帶Cy5濾鏡的顯微鏡觀察熒光信號(hào)。