公司簡(jiǎn)介

西安百螢生物科技有限公司是一家專(zhuān)注從事生物、化學(xué)試劑及其試劑盒的；主要以熒光探針，分子探針，核酸/蛋白質(zhì)標(biāo)記、細(xì)胞檢測(cè)等技術(shù)和產(chǎn)品為研發(fā)核心，產(chǎn)品應(yīng)用于基因合成、細(xì)胞檢測(cè)、活體示蹤，抗體標(biāo)記、新藥篩選等領(lǐng)域。

我們的Cell Meter Annexin V凋亡檢測(cè)試劑盒 是一套用于檢測(cè)細(xì)胞生存力的工具。 有多種參數(shù)可用于檢測(cè)細(xì)胞活力。 該特定試劑盒旨在通過(guò)測(cè)量磷脂酰*（PS）的轉(zhuǎn)運(yùn)來(lái)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的Cell Meter Annexin V凋亡檢測(cè)試劑盒。

實(shí)驗(yàn)方案

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

用測(cè)試化合物制備細(xì)胞（200 µL /樣品）

添加膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 500分析溶液

在室溫下孵育30-60分鐘

使用帶有525/40 nm濾光片（AmCyan通道）的流式細(xì)胞儀或帶有紫色濾光片組的熒光顯微鏡分析細(xì)胞

實(shí)驗(yàn)步驟

1.用膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 500制備和孵育細(xì)胞：

1.1用測(cè)試化合物處理細(xì)胞一段時(shí)間（對(duì)于用星形孢菌素處理過(guò)的Jurkat細(xì)胞，需要4-6小時(shí)）以細(xì)胞凋亡。

1.2離心細(xì)胞以獲得1-5×105細(xì)胞/管。

1.3將細(xì)胞重懸于200 µL分析緩沖液（組分B）中。

1.4在細(xì)胞中加入2 µL Annexin V-mFluor Violet 500（組分A）。

1.5可選：向壞死的細(xì)胞中加入2 µL 100X碘化丙啶（組分C）。

1.6避光保存，于室溫下孵育30至60分鐘。

1.7在使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡分析細(xì)胞之前，添加300 µL分析緩沖液（組分B）以增加體積。

1.8使用帶有525/40 nm濾光片的流式細(xì)胞儀（AmCyan通道）或帶有紫色濾光片組的熒光顯微鏡檢測(cè)熒光強(qiáng)度。

2.通過(guò)使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析：

2.1使用帶有525/40 nm濾光片的流式細(xì)胞儀（AmCyan通道）定量膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 500結(jié)合。 將碘化丙啶加入細(xì)胞后，使用610/20 nm濾光片（PE-德克薩斯紅通道）測(cè)量細(xì)胞活力。 注意：對(duì)貼壁細(xì)胞的膜聯(lián)蛋白V結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)分析未經(jīng)過(guò)常規(guī)測(cè)試，因?yàn)樵诩?xì)胞分離或收獲過(guò)程中可能會(huì)發(fā)生特定的膜損傷。 

3.通過(guò)使用熒光顯微鏡進(jìn)行分析：

3.1孵育后用移液管吸移細(xì)胞懸液，用測(cè)定緩沖液沖洗1-2次，然后用測(cè)定緩沖液重懸細(xì)胞。

3.2將細(xì)胞添加到載玻片蓋玻片的載玻片上。注意：對(duì)于貼壁細(xì)胞，建議直接在蓋玻片上生長(zhǎng)細(xì)胞。與膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 500一起孵育后，用測(cè)定緩沖液沖洗1-2次，然后將測(cè)定緩沖液加到蓋玻片上。將玻片上的蓋玻片倒置并可視化細(xì)胞。與膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 500孵育后，還可以將細(xì)胞固定在2％甲醛中，并在顯微鏡下觀察。

3.3使用紫羅蘭濾光片組在熒光顯微鏡下用膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 500分析凋亡細(xì)胞。當(dāng)?shù)饣V添加到細(xì)胞中時(shí)，使用TRITC通道測(cè)量細(xì)胞活力。質(zhì)膜上的綠色染色表明膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 500與細(xì)胞表面的PS結(jié)合。