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我們的Cell Meter 細(xì)胞活性檢測試劑盒紅色熒光 是一套用于監(jiān)測細(xì)胞生存力的工具。有多種參數(shù)可用于監(jiān)測細(xì)胞活力。該試劑盒使用專有的非熒光染料，進(jìn)入活細(xì)胞后可增強(qiáng)紅色熒光。該染料是疏水性化合物，易于滲透完整的活細(xì)胞。細(xì)胞內(nèi)酯酶對非熒光底物的水解產(chǎn)生了強(qiáng)烈熒光的親水產(chǎn)物，該產(chǎn)物被很好地保留在細(xì)胞質(zhì)中。酯酶活性與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，因此與由酯酶催化的熒光底物水解產(chǎn)生的產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度直接相關(guān)。黑色壁板中生長的細(xì)胞可以在不到兩個(gè)小時(shí)的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行染色和定量。該測定比基于四唑鎓鹽或基于Alarmar Blue™的測定更穩(wěn)定。它可以很容易地適用于各種熒光平臺(tái)中的高通量檢測，例如微孔板檢測，免疫細(xì)胞化學(xué)和流式細(xì)胞儀。它可用于多種研究，包括細(xì)胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細(xì)胞生存力，細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性。該套件為所有基本組件提供了優(yōu)化的細(xì)胞標(biāo)記方案。它適用于增殖和非增殖細(xì)胞，可用于懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞。熒光指示劑具有與Cy3 / TRITC濾光片組兼容的光譜特性。Cell Meter 細(xì)胞活性檢測試劑盒紅色熒光

簡要概述

用測試化合物進(jìn)行細(xì)胞準(zhǔn)備工作
去掉培養(yǎng)基
加入CytoCalcein™Red AM工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）
室溫下孵育30min-1h
監(jiān)測Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的熒光強(qiáng)度（底部讀取模式）

儲(chǔ)備溶液配制
除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. CytoCalcein™Red AM儲(chǔ)備溶液：
向CytoCalcein™Red AM小瓶（組分A）中加入20 µL DMSO（組分B），并充分混合以制成CytoCalcein™Red AM儲(chǔ)備液。注意：20 µL CytoCalcein™Red AM儲(chǔ)備液足以裝滿一塊板。避光。為了存放，請將管子緊緊密封。注意：如果試管密封嚴(yán)密，可將未使用的CytoCalcein™Red儲(chǔ)備液分裝并在<-20℃下保存1個(gè)月。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

工作溶液配制
將全部內(nèi)容物（20 µL）的CytoCalcein™Red AM儲(chǔ)備溶液添加到10 mL的測定緩沖液（組分C）中，并充分混合以制成CytoCalcein™Red AM工作溶液。注意：此CytoCalcein™Red AM工作溶液不穩(wěn)定，請立即使用。注意：如果這些細(xì)胞（例如CHO細(xì)胞）含有會(huì)導(dǎo)致熒光染料隨時(shí)間泄漏的有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，則應(yīng)準(zhǔn)備丙*舒儲(chǔ)備溶液并以孔內(nèi)工作濃度1加入到緩沖液中 -2.5毫米分裝并保存未使用的丙*舒儲(chǔ)備溶液于≤-20 ℃。

操作步驟

根據(jù)需要用測試化合物處理細(xì)胞。注意：添加化合物之前不必洗滌細(xì)胞。但是，如果測試的化合物對血清敏感，則可以在添加化合物之前將生長培養(yǎng)基和血清因子吸掉。加入100 µL /孔（96孔板）和25 µL /孔（384孔板）的1X Hank鹽溶液和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或抽吸后選擇的緩沖液。或者，細(xì)胞可以在無血清培養(yǎng)基中生長。
去除生長培養(yǎng)基
加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的CytoCalcein™Red AM工作溶液。
在避光的條件下，在室溫或37°C下孵育板30分鐘至1小時(shí)。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所用的單個(gè)細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。對于非貼壁細(xì)胞，建議在孵育后以800 rpm的速度離心細(xì)胞板2分鐘。
使用熒光酶標(biāo)儀（底部讀取模式）在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）下監(jiān)控?zé)晒鈴?qiáng)度。