天根 CB104-02 -0感受態(tài)細(xì)胞介紹

產(chǎn)品簡介:

天根生化 TIANGEN公司生產(chǎn)的0感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌 0菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用 pUC19質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108 ,-70℃保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

每支感受態(tài)可以酌情分裝使用,降低了實(shí)驗(yàn)的成本。質(zhì)量穩(wěn)定,使用方便,。

產(chǎn)品特點(diǎn):

0菌株轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108 以上。適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增。能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

基因型:

• F- mcrA △(mrr-hsd RMS-mcr BC)
• φ80lacZ△ M15 △lac X74 recA1
• ara△139  △(ara-leu) 7697 galU
• galK rpsL (Strr) endA1 nupG

儲存條件:

-70℃凍存

天根 CB104-02 -0感受態(tài)細(xì)胞 操作方法：（以下各步驟均為無菌操作）

1，將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化，以下實(shí)驗(yàn)以100ul感受態(tài)細(xì)胞為例。

2、向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的DNA，注意目的DNA的體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，冰浴放置30分鐘。

3、將離心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速轉(zhuǎn)移到冰浴中放置2-3分鐘，注意不要搖動離心管。

4、向離心管中加入500ul無菌無抗的SOC或LB培養(yǎng)基，37℃ 180rpm振蕩培養(yǎng)1小時。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

5、取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時。涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取100ul左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300ul的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板。過多菌液可以抑制細(xì)菌生長。如果預(yù)計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

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注意事項(xiàng)：

1、感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會降低。

2、實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3、轉(zhuǎn)化時，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。

4、轉(zhuǎn)化率的計算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

5、為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到。

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