天根TIANScriptⅡcDNA試劑盒-qpcr試劑盒-逆轉(zhuǎn)錄試劑盒-KR107

產(chǎn)品簡介：

本試劑盒提供了所有的用于cDNA鏈合成的試劑，其中的TIANScriptⅡRTase為改良后的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MLV），改良后的新RTase具有更高的模板親和力和更低的RNase H活性，因此使其在cDNA條鏈的合成過程中具有通讀復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)模板和反轉(zhuǎn)錄長片段cDNA的能力。產(chǎn)品中配備的5×TIANScriptⅡRTase Buffer經(jīng)過精心的優(yōu)化，既保證了新型RTase的高效酶活，又拓寬了RNA模板量的加入范圍，使得反轉(zhuǎn)錄出來的cDNA利于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)分析。

■ 酶活效率高：效率高的反轉(zhuǎn)錄酶活性，后續(xù)實(shí)驗(yàn)兼容性好。

■ 底物范圍廣：適用于所有RNA，尤其是具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的RNA 模板。

■ 反轉(zhuǎn)片段長：cDNA 鏈合成可以達(dá)到12 kb。

■ 操作簡單：只需一步添加所需成分，無需中間加入其他試劑。

天根TIANScriptⅡcDNA試劑盒適用范圍：

1. cDNA鏈的合成；

2. cDNA文庫的構(gòu)建；

3. 一步法RT-PCR；

4. RACE分析。

實(shí)驗(yàn)步驟：

注意事項(xiàng)：請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。

1. 用于cDNA合成反應(yīng)的溶液試劑盡可能用DEPC進(jìn)行處理，并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時(shí)，用經(jīng)過滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進(jìn)行濾除菌處理。

2. RNA樣品要避免基因組DNA污染；

3. 避免反復(fù)凍融RNA，使RNA保持在冰浴中處融化狀態(tài)；

4. 試劑盒中各組分成分應(yīng)在-20℃保存；

5. 在使用Random Primer時(shí)，要注意隨機(jī)引物量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議50 ng隨機(jī)引物/5 ug總RNA。當(dāng)提高Random/RNA的比率將會(huì)提高短片段（～500 bp）cDNA的合成；而當(dāng)降低Random/RNA的比率將會(huì)提高長片段cDNA的合成；

6. 如果模板RNA富含二級結(jié)構(gòu)，可以先在65℃條件下處理5min；

7. 如果反轉(zhuǎn)錄中使用PCR下游引物，為了防止引物錯(cuò)配導(dǎo)致的非特異擴(kuò)增，可以在50℃條件下進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄；

8. 在進(jìn)行長片段擴(kuò)增時(shí)，為了防止cDNA結(jié)果被破壞，建議以70℃下處理15 min為酶滅活條件；

9. 當(dāng)使用酶類時(shí)，應(yīng)輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部，由于酶粘度高，吸取時(shí)應(yīng)慢慢吸取。

注意：如果要擴(kuò)增長片段，需使用新鮮提取所得的完整性好、純度高的RNA。

儲(chǔ)存條件

本產(chǎn)品中的各成分可在-20℃條件下保存1年。