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碧云天細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒?-C1052

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更新時間:2023-06-17 07:24:17瀏覽次數(shù):245次

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碧云天生產(chǎn)的細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒(CellCycleandApoptosisAnalysisKit)是一種采用經(jīng)典的PI染色方法進行細胞周期與細胞凋亡分析的檢測試劑盒。可用于需使用流式細胞儀進行的細胞凋亡檢測。

碧云天細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒-C1052

碧云天試劑C1052

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 產(chǎn)品包裝
C1052 細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒 50次

碧云天生產(chǎn)的細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一種采用經(jīng)典的PI染色方法進行細胞周期與細胞凋亡分析的檢測試劑盒。
 PI是一種雙鏈DNA的熒光染料。PI和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光,并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內(nèi)的DNA被PI染色后,可以用流式細胞儀對細胞進行DNA含量測定,然后根據(jù)DNA含量的分布情況,可以進行細胞周期和細胞凋亡分析。
PI染色后,假設G0/G1期細胞的熒光強度為1,那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2,正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。凋亡細胞由于細胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化(DNA fragmentation)導致部分基因組DNA片段在染色過程中丟失,因此凋亡細胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染,即熒光強度小于1,在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰,即凋亡細胞峰。
細胞發(fā)生凋亡時,由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂,產(chǎn)生凋亡小體,使細胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細胞凋亡的早期,細胞對前向角光散射的能力顯著降低,對側(cè)向光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期,前向和側(cè)向光散射的信號均降低。因此可通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化觀察細胞凋亡情況。
本試劑盒通常應用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細胞的細胞周期與細胞凋亡檢測。如果用于組織的細胞周期與細胞凋亡檢測,則必須把組織消化成單細胞狀態(tài),才可以進行檢測。
本試劑盒足夠檢測50個樣品,每個樣品的細胞數(shù)量可以為10-100萬。
包裝清單:

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
C1052-1 染色緩沖液 25ml
C1052-2 PI染色液(20X) 1.25ml
C1052-3 RNase A(50X) 0.5ml
說明書 1份


保存條件:
-20℃保存,一年有效。C1052-2碘化丙啶染色液(20X)需避光保存。本試劑盒可4℃保存,一個月內(nèi)有效。
注意事項:
本試劑盒需使用流式細胞儀進行檢測。


使用說明:
1. 細胞樣品的準備:
a. 對于貼壁細胞:小心收集細胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。


用消化細胞,至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時,加入前面收集的細胞培養(yǎng)液,吹打下所有的貼壁細胞,并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000g左右離心3-5分鐘,沉淀細胞。

如果細胞沉淀不充分,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入約1毫升冰浴預冷的PBS,重懸細胞,并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細胞,小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的PBS,以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞,避免細胞成團。


b. 對于懸浮細胞:1000g左右離心3-5分鐘,沉淀細胞。如果細胞沉淀不充分,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。

小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入約1毫升冰浴預冷的PBS,重懸細胞,并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細胞,小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的PBS,以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞,避免細胞成團。
2. 細胞固定:加入1毫升冰浴預冷70%C2H5OH) 中,輕輕吹打混勻,4℃固定30分鐘或更長時間。通常固定2小時或以上更能保證染色效果,固定12-24小時可能效果更佳。1000g左右離心3-5分鐘,沉淀細胞。如果細胞沉淀不充分,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。

小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的70%乙醇,以避免吸走細胞。加入約1毫升冰浴預冷的PBS,重懸細胞。再次離心沉淀細胞,小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的PBS,以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞,避免細胞成團。
3. PI染色液的配制:參考下表,根據(jù)待檢測樣品的數(shù)量配制適量的PI染色液:


1個樣品 6個樣品 12個樣品
染色緩沖液 0.5ml 3ml 6ml
PI染色液(20X) 25μl 150μl 300μl
RNase A(50X) 10μl 60μl 120μl
Final volume 0.535ml 3.21ml 6.42ml

注:配制好的碘化丙啶染色液短時間內(nèi)可以4℃保存,宜當日使用。
4. 染色:每管細胞樣品中加入0.5毫升碘化丙啶染色液,緩慢并充分重懸細胞沉淀,37℃避光溫浴30分鐘。隨后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小時內(nèi)完成流式檢測,能在當日完成流式檢測。
5. 流式檢測和分析:用流式細胞儀在激發(fā)波長488nm波長處檢測紅色熒光,同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行細胞
DNA含量分析和光散射分析。


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