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MTT 細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒- MTT Cell Proliferation Assay

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更新時(shí)間:2023-06-17 07:45:19瀏覽次數(shù):158次

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MTT 細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒 作為高靈敏度成本低廉的細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑,已經(jīng)廣泛應(yīng)用于一些生物 活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等領(lǐng)域,它的特點(diǎn)是敏感度高、成本低廉。

MTT細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒

 MTT Cell Proliferation Assay 

MTT細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒


貨號(hào) 規(guī)格 BDXB0004 100次 

保存:4℃避光保存,保質(zhì)期1年 

 MTT Cell Proliferation Assay 產(chǎn)品概述

    MTT全稱(chēng)為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,漢語(yǔ)化學(xué) 名為3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,商品名:噻唑藍(lán),是一種黃顏色的染 料。 活細(xì)胞線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臢 (Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的 甲臢,用酶標(biāo)儀在500-600nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成 的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測(cè)得的吸光度值(OD值)來(lái)判斷活細(xì)胞數(shù)量,OD值越大,細(xì)胞 活性越強(qiáng)(如果是測(cè)藥物毒性,則表示藥物毒性越?。?。

   MTT法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于一些生物 活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等領(lǐng)域,它的特點(diǎn)是敏感度高、成本低廉。它的缺點(diǎn)是需要使用有機(jī)溶劑,不僅是工作量增加, 也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響。 

 MTT 細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒組成

 1. MTT試劑:10ml 

2. 甲臢溶解液:100ml 

需要自己準(zhǔn)備的材料

 1. PBS(無(wú)菌)

 2. 細(xì)胞培養(yǎng)基(無(wú)菌)

 3. 96孔板(組織培養(yǎng)級(jí),平底,無(wú)菌) 

4. 倒置顯微鏡 

5. 排槍 

6. 細(xì)胞CO2培養(yǎng)箱 

7. 酶標(biāo)儀(含650、570nm濾光片)

 使用方法 

1. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康娜〔煌瑪?shù)量的細(xì)胞進(jìn)行96孔板的鋪板(參考值:細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入 100μl約2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100μl約5000個(gè)細(xì)胞。如有可能,先做 預(yù)實(shí)驗(yàn),確定細(xì)胞鋪板的數(shù)量)。

 2. 待細(xì)胞貼壁、生長(zhǎng)恢復(fù)后,按照實(shí)驗(yàn)需要,給予不同濃度的藥物刺激等處理。

 3. 每孔加入10μl的MTT試劑。(如果細(xì)胞培養(yǎng)基體積大于100μl,按比例調(diào)整加入MTT試 劑的量)

 4. 37℃孵育2-4hr。間或用顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)沉淀形成情況。

 5. 當(dāng)顯微鏡下能看到明顯的紫色結(jié)晶沉淀時(shí),每孔加入100μl甲臢溶解液(包括對(duì)照孔)。 勿晃動(dòng)。

 6. 室溫(18-24℃)避光放置至少2hr(最長(zhǎng)可以過(guò)夜)。如果讀數(shù)偏低,并且紫色結(jié)晶溶 解不,可以繼續(xù)放置。(通常室溫放置就足夠,但37℃有助于加速結(jié)晶的溶解)

 7. 去蓋,將孔板放到酶標(biāo)儀中,在570nm(或介于550-600nm間的任意波長(zhǎng))測(cè)定OD值, 參比波長(zhǎng)650nm。

 MTT 細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒 注意事項(xiàng) 

1. 實(shí)驗(yàn)中必須設(shè)立陰性對(duì)照。 空白孔的OD值應(yīng)該在0±0.1之間 未處理細(xì)胞的OD值通常應(yīng)該在0.75-1.25之間

 2. 陽(yáng)性對(duì)照也應(yīng)該設(shè)

立。

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