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蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司

h460細(xì)胞株

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更新時(shí)間:2023-06-17 08:04:20瀏覽次數(shù):120次

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細(xì)胞名稱:人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞(STR鑒定正確)細(xì)胞別稱:NCI-H460細(xì)胞;NCI.H460; H460; H-460; NCIH460; NCI-HUT-460; NCI-460h460細(xì)胞株購(gòu)買;h460細(xì)胞株培養(yǎng)基貨號(hào):TCH-G286

h460細(xì)胞株

細(xì)胞名稱:人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞(STR鑒定正確)

細(xì)胞別稱NCI-H460細(xì)胞;NCI.H460; H460; H-460; NCIH460; NCI-HUT-460; NCI-460

細(xì)胞簡(jiǎn)稱:h460細(xì)胞株

產(chǎn)品貨號(hào):TCH-C286

種屬來(lái)源:人

組織來(lái)源:肺

特征:肺癌

細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)體系:RPMI-1640 +10% FBS+1% P/S

h460細(xì)胞株培養(yǎng)基貨號(hào):TCH-G286

傳代比例:1:3-1:6,每2-3天換液一次

傳代周期:24-48 h

培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%CO 2,溫度:37℃

凍存條件:60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO,液氮儲(chǔ)存

質(zhì)量檢測(cè):細(xì)菌、真菌、支原體檢測(cè)均為陰性

NCI-H460細(xì)胞

  NCI-H460細(xì)胞是從一位大細(xì)胞肺癌者的胸水中建立的。h460細(xì)胞株表達(dá)的p53 mRNA易于檢測(cè),其水平與正常肺細(xì)胞相當(dāng),未表現(xiàn)出NCI-H460細(xì)胞DNA總體結(jié)構(gòu)異常。NCI-H460細(xì)胞角蛋白和波形蛋白纖維染色陽(yáng)性;神經(jīng)絲三聯(lián)體蛋白陰性。


細(xì)胞培養(yǎng)操作說明

細(xì)胞的復(fù)蘇:

 1. 從液氮中取出細(xì)胞凍存管,快速將其置入37℃水浴中解凍直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,75%的酒精擦拭凍存管外壁;

 2. 將凍存管中的細(xì)胞移至含 6ml 培養(yǎng)基的15ml 離心管中,1000rpm離心 5min;

 3. 棄上清,沉淀用 6ml 培養(yǎng)基重懸,接種25cm2 培養(yǎng)瓶,于37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 

傳代: 

(1)貼壁細(xì)胞:

 1. 細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí),棄25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS 清洗細(xì)胞一次;

 2. 添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心5min;

3. 棄上清,沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸,按1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代,補(bǔ)加培養(yǎng)基后放入 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

(2)懸浮細(xì)胞: 待細(xì)胞達(dá)到 1x10^6/ml 左右可按照以下方法換液培養(yǎng)或傳代。

方法①:收集細(xì)胞,1000rpm 離心 5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例分到含培養(yǎng)基的新瓶中。

方法②:豎立放置培養(yǎng)瓶,細(xì)胞沉淀后棄去上半量培養(yǎng)基,將細(xì)胞懸液按1:2 到 1:3 的比例分到含培養(yǎng)基的新瓶中。凍存: 1. 離心收集細(xì)胞并進(jìn)行計(jì)數(shù)(參考離心條件:1000rpm,5 min)。移去離心管中的上清液; 3. 加入適量的無(wú)血清細(xì)胞凍存液于離心管中,調(diào)整細(xì)胞濃度至 1~5×10 6 cells/mL。輕柔混勻,制成細(xì)胞凍存懸液;

4. 將離心管中的細(xì)胞凍存懸液分裝于已標(biāo)示的凍存管中;

5. 直接將含細(xì)胞懸液的凍存管放入-80℃冰箱,長(zhǎng)期冷凍保存或轉(zhuǎn)入液氮?dú)庀嘀写鎯?chǔ)??梢允褂靡徊椒▋龃嬉?。

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