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實驗臺廠家淺談PCR實驗室建設(shè)時需要遵循哪些規(guī)章規(guī)范?
PCR實驗室又稱基因擴增實驗室,其特點是能將微量的DNA大幅增加,PCR是分子生物學(xué)研究和實驗的常規(guī)方法,廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個領(lǐng)域。那么PCR實驗室建設(shè)時需要遵循哪些規(guī)章規(guī)范呢?
一、PCR實驗室布局
PCR實驗室原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域并設(shè)有專用走廊,各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨立的,各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志,不能直通。如果緊密相連,需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴增前區(qū),后兩區(qū)為擴增后區(qū),擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開。實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,只能從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),即從試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū),不得逆向流動。實驗室的氣流也應(yīng)從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),不得逆向流動。各工作區(qū)頂部應(yīng)安裝紫外燈,紫外燈的波長為254nm,每20㎡一支40W的紫外燈。
二、PCR實驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備
1、試劑準(zhǔn)備區(qū):主要進行試劑的制備、分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū),不得經(jīng)過其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。本區(qū)主要設(shè)備有天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器等。
對于氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。
2、樣品制備區(qū):主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。
本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。
3、擴增區(qū):主要進行DNA擴增。此外,已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準(zhǔn)備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)主要設(shè)備有:擴增儀、冰箱、離心機、加樣器等。
本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。
4、擴增產(chǎn)物分析區(qū):擴增產(chǎn)物的測定。本區(qū)主要設(shè)備有酶標(biāo)儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。
本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。
三、PCR實驗室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制
各區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實驗工藝流、物流、人流與氣流,形成單向流程的保護屏障,避免實驗之間的相互干擾,防止氣溶膠擴散對實驗過程造成污染。
PCR實驗室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個實驗區(qū)域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式,嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。
四、PCR實驗室裝修
實驗室圍護結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固、氣密性好;所有陰陽角宜采用圓弧過渡;墻體內(nèi)壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒;地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪,材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。
五、PCR實驗室注意事項
1、幾個區(qū)域的大小設(shè)置情況,試劑準(zhǔn)備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū),空間可以相對小一些,樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱,空間應(yīng)大一些。
2、試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)設(shè)緊急洗眼器,以保證操作人員的安全。
3、PCR實驗室沒有嚴(yán)格的凈化要求,可以根據(jù)用戶的使用情況和資金的投入選擇。
以上就是PCR實驗室建設(shè)時需要遵循的一些規(guī)章規(guī)范。
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