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YIJI 活體組織氧化應(yīng)激活性氧（ROS）高質(zhì)熒光測(cè)定試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）
主要用途
YIJI 活體組織氧化應(yīng)激活性氧（ROS）高質(zhì)熒光測(cè)定試劑是一種旨在通過(guò)透膜熒光染色劑氯甲基二氯
二氫熒光素二乙酯，在組織氧化損傷條件下，產(chǎn)生熒光，來(lái)定量檢測(cè)組織內(nèi)活性氧族的生成和增加的
而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適宜于活體動(dòng)物組織的分析?？?br>以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、衰老、代謝和營(yíng)養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)易，活
體檢測(cè)，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2-）、過(guò)氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基
（hydroxyl radical；OH-）、過(guò)氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氫過(guò)氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷
氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、過(guò)氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO-）
次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等
細(xì)胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導(dǎo)致細(xì)胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二
氫熒光素二乙酯（6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl ester；CM－H2DCFDA）是
取代二氯二氫熒光素二乙酯（2′,7′-dichlorodihydrofluorescin diacetate；DCFH-DA）的升級(jí)產(chǎn)品，一種*
自由通過(guò)細(xì)胞膜，并在細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)期滯留而不易外漏的染色劑。一旦被過(guò)氧化氫、羥自由基或氫氧基、過(guò)氧
化基、次氯酸等氧化，便產(chǎn)生熒光。據(jù)此測(cè)定組織細(xì)胞內(nèi)活性氧族的濃度。
產(chǎn)品內(nèi)容
YIJI 清理液（Reagent A）
YIJI 染色液（Reagent B）
YIJI 稀釋液（Reagent C）
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
毫升
微升
毫升
1份
保存方式
保存 YIJI 染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，嚴(yán)格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保
證6月
用戶(hù)自備
50 毫升錐形離心管：用于組織收集的容器
15 毫升錐形離心管：用于工作液配制和組織處理的容器
1.5 毫升離心管：用于工作液配制的容器
6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板：用于組織染色的容器
培養(yǎng)箱或恒溫水槽：用于染色孵育
熒光顯微鏡：用于觀察熒光組織

熒光分光光度儀：用于組織熒光定量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)步驟
方法一：新鮮組織薄片定性檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的 YIJI 染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，YIJI
稀釋液（Reagent C）放進(jìn) 37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出 xx 微升 YIJI 染色液（Reagent B）到新
的 15 毫升錐形離心管，加入 xx 毫升 YIJI 稀釋液（Reagent C)，混勻后，將 YIJI 染色工作液
置入暗室里。然后進(jìn)行下列操作。
1． 手術(shù)取出動(dòng)物組織
2． 放進(jìn)預(yù)冷的 50 毫升錐形離心管
3． 加入 xx 毫升 YIJI 清理液（Reagent A）浸泡 15 秒
4． 用鑷子取出組織，用無(wú)菌綿紙吸干
5． 即刻用刀片切離組織為 1cm X 1cm 大小的片狀組織
6． 用鑷子將組織薄片放進(jìn) 6 孔培養(yǎng)板的一個(gè)孔
7． 加 xx 毫升含有 YIJI 染色液（Reagent B）和 YIJI 稀釋液（Reagent C）的 YIJI 染色
工作液
8． 放進(jìn) 37℃培養(yǎng)箱孵育 20 分鐘，避免光照（注意：如果組織薄片較厚，可以增加孵育時(shí)間至 60 分鐘）
9． 小心抽去 YIJI 染色工作液
10．加入 xx 毫升 YIJI 清理液（Reagent A）
11．用鑷子將組織薄片放在載玻片上
12．壓片
13．即刻在熒光顯微鏡下觀察（定性檢測(cè)）：激發(fā)波長(zhǎng) 490nm，散發(fā)波長(zhǎng) 520nm――熒光增強(qiáng)，表明活性氧
族（ROS）含量高
方法二：組織勻漿定量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的 YIJI 染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，YIJI
稀釋液（Reagent C）放進(jìn) 37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出 xx 微升 YIJI 染色液（Reagent B）到新
的 1.5 毫升離心管，加入 xx 微升YIJI 稀釋液（Reagent C)，混勻后，將 YIJI 染色工作液置入
暗室里。然后進(jìn)行下列操作。
1． 手術(shù)取出動(dòng)物組織，并秤重以確定組織重量 100 毫克
2． 放進(jìn)預(yù)冷的 50 毫升錐形離心管
3． 加 xx 毫升的 YIJI 清理液（Reagent A）
4． 用鑷子取出組織，用無(wú)菌綿紙吸干
5． 即刻用刀片切碎組織
6． 放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管
7． 加入 xx 毫升預(yù)冷的 YIJI 稀釋液（Reagent C）
8． 渦旋震蕩 5 秒，充分混勻
9． 即刻放入預(yù)冷的 YIJI 勻漿器
10．在冰槽里用研磨棒勻化組織（注意：切莫過(guò)度勻化）

11．將所有組織勻漿物移入 15 毫升錐形離心管
12．置入冰槽里備用
13．移取 5 微升組織勻漿物進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)：建議使用 YIJI Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒
（GMS30030.1）
14．移取 xx 微升組織勻漿物（樣品：100 微克蛋白）或 xx 微升 YIJI 稀釋液（Reagent C）（背景對(duì)
照）到 1 毫升比色杯里
15．加入 xx 微升升含有 YIJI 染色液（Reagent B）和 YIJI 稀釋液（Reagent C）的 YIJI
染色工作液
16．上下傾倒混勻
17．放進(jìn) 37℃恒溫水槽孵育 20 分鐘，避免光照
18．即刻放進(jìn)熒光分光光度儀檢測(cè)：激發(fā)波長(zhǎng) 490nm，散發(fā)波長(zhǎng) 520nm——（樣品 RFU-對(duì)照 RFU）＝實(shí)
際 RFU：增加，表明活性氧族（ROS）含量高
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為 20 次（組織勻漿）或 8 次（組織薄片）操作，包括背景對(duì)照
2． 建議使用新鮮組織，手術(shù)切除后 1 小時(shí)內(nèi)的樣品
3． 操作時(shí)，須戴手套
4． 系統(tǒng)檢測(cè)，背景對(duì)照只需 1 次
5． YIJI 染色工作液配制后 1 小時(shí)內(nèi)使用為佳
6． 孵育時(shí)，須避免光照
7． 如果組織薄片較厚，可以增加孵育時(shí)間至 60 分鐘
8． 組織勻漿時(shí)，切莫過(guò)度
9． 建議組織染色完成后，即刻進(jìn)行熒光定量或定性分析
10．本公司提供陽(yáng)性對(duì)照甲萘醌溶液，觀察組織熒光增強(qiáng)現(xiàn)象
11．本公司提供系列活性氧檢測(cè)試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰

上海市浦東新區(qū)張楊北路5972號(hào)

：200137

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