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YIJI*-S-轉移酶融合蛋白*酶切試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

YIJI*-S-轉移酶融合蛋白*酶切試劑是一種旨在通過*的特異作用序列，達到重組表達目標多肽與融合克隆載體的分離，而獲得純化目標蛋白的而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種pGEX T表達載體上融合或標記在*-S-轉移酶上目標蛋白的分離純化。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作便捷，分離效率高。

技術背景

研究編碼蛋白首先通過重組DNA技術在細菌中表達，其中*-S-轉移酶（GST）融合蛋白系統(tǒng)有效地幫助目的基因獲得高表達的目標蛋白。目的基因被引入到細菌中高度表達的*-S-轉移酶基因，利用該基因的表達系統(tǒng)，避免了翻譯過程中影響表達的各種因素，從而得到滿意的表達產(chǎn)物。*（Thrombin），分子量37Kd，是一種內源性蛋白酶，將原纖維蛋白（fibrinogen）切離為纖維蛋白（fibrin），促進血液凝固。其切離序列為LeuValProArg¯GlySer，出現(xiàn)在大多數(shù)表達載體，便于獲取目標蛋白。

產(chǎn)品內容

YIJI緩沖液（Reagent A） 微升

YIJI酶解液（Reagent B）      微升

YIJI補充液（Reagent C）      毫升

產(chǎn)品說明書     1份

保存方式

保存YIJI酶解液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免反復凍融；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于反應操作和保存樣本的容器

平式搖蕩儀：用于混勻反應物

微型臺式離心機：用于沉淀反應物

實驗步驟

實驗開始前，準備好GST樹脂純化操作，直至洗脫處理前；同時將YIJI酶解液（Reagent B）從－20℃冰箱里取出，在冰槽里融化。然后進行下列操作。

• 準備1個1.5毫升離心管
• 移入已經(jīng)含有目標蛋白結合處理的GST樹脂（注意：未經(jīng)洗脫處理）
• 或直接使用剛剛操作的GST樹脂（注意：未經(jīng)洗脫處理）
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為3500g
• 小心抽去上清液
• 加入xx微升YIJI緩沖液（Reagent A）
• 加入xx微升YIJI酶解液（Reagent B）
• 加入xx微升YIJI補充液（Reagent C）
• 輕柔渦旋震蕩5秒，混勻
• 放進20℃恒溫水槽孵育16小時
• 或平放在平式搖蕩儀上，在20℃溫度下孵育16小時，速度為50RPM
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為3500g
• 小心移取上清液到預冷的新的1.5毫升離心管
• 即刻放進－70℃冰箱里保存
• 或移取2至5微升進行SDS-PAGE電泳鑒定目標蛋白片段

注意事項

• 本產(chǎn)品為10次操作
• 操作時，須戴手套
• YIJI酶解液（Reagent B）避免反復凍融，建議分裝 
• YIJI酶解液（Reagent B）的切離能力取決于融合蛋白的三維結構、序列位置等各種因素；通常10微升即0.5單位YIJI酶解液（Reagent B）可以切離500微克目標蛋白，其切離效率可達95% 
• 增加切離能力的方法是：測試各種濃度的YIJI酶解液（Reagent B）、孵育溫度（4至37℃）和孵育時間（2至16小時）
• 避免樣品中含有PMSF、DTT、UREA等
• 避免過量使用YIJI酶解液（Reagent B）
• 如果純化效果欠佳，建議使用PROTEASE（YIJI GST融合蛋白PROTEASE酶切試劑盒-yiji30070.1）、或因子10a（YIJI GST融合蛋白因子10a酶切試劑盒-yiji30070.3）等酶切 
• 本公司提供系列融合蛋白處理試劑產(chǎn)品

質量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離效果滿意
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含有HBsAg and HIV抗原

上海一基實業(yè)有限公司

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