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禽流感H7N9病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒

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廣州健侖生物科技有限公司

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禽流感H7N9病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒

詳細(xì)介紹

H7N9禽流感病毒檢測(cè)試劑盒， H7N9禽流感病毒診斷試劑盒， H7N9試劑盒

H7N9禽流感病毒核酸熒光PCR測(cè)定試劑盒

Avian influenza virus （H7N9） Real Time RT-PCR Kit

H7N9禽流感病毒試劑產(chǎn)品專(zhuān)線(xiàn):189 2505 2681

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名稱(chēng)：禽流感病毒H7N9核酸測(cè)定試劑盒

英文名稱(chēng)：Avian influenza virus （H7N9） Real Time RT-PCR Kit

【包裝規(guī)格】 25T/盒

【用途】通過(guò)對(duì)樣本中禽流感病毒H7基因和N9基因的特異性RNA核酸片段分別進(jìn)行定性檢測(cè)，可用于臨床對(duì)可疑感染患者的病原學(xué)鑒別診斷。

【檢驗(yàn)原理】本試劑盒采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)結(jié)合熒光探針技術(shù)，對(duì)禽流感H7N9特異性核酸片段進(jìn)行熒光PCR檢測(cè)。

【試劑盒主要組成成份】

序號(hào)	組分		數(shù)量		體積／人份
1	H7N9核酸熒光PCR檢測(cè)混合液		480?l×1		19?l
2	RT-PCR酶		28?l×1		1?l
3		DEPC-H2O		400?l×1
4		陽(yáng)性對(duì)照品		30?l×1

說(shuō)明：不同批號(hào)的組分不可以互換使用。

自備試劑：Trizol；氯仿；75%乙醇；異丙醇或磁珠法RNA提取試劑；本公司可以代為訂購(gòu)或提供銷(xiāo)售商。

【儲(chǔ)存條件和有效期】試劑盒應(yīng)在－20℃及以下溫度避光保存，有效期12個(gè)月。采用冰盒行運(yùn)輸；熒光PCR檢測(cè)混合液反復(fù)凍融不宜超過(guò)3次。

【適用儀器】本試劑盒適用于ABI7000，ABI7300，ABI7500，ABI7900，MJ-chromo4，MX3000P，MX3005P，SmartCyclerⅡ，Rotor-Gene6000，Lightcycler R480，iCycleriQ4，iCycleriQ5，Bio-Rad CFX96，SLAN等多色熒光PCR儀及相應(yīng)軟件。

【標(biāo)本要求】

人體鼻腔或咽部分泌物:用無(wú)菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，將分泌物或*置入無(wú)菌玻璃管（含0.4ml滅菌生理鹽水），用無(wú)菌棉球?qū)⒃嚬苋o后，密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測(cè)，也可保存于-20℃待測(cè)。【檢驗(yàn)方法】

1.標(biāo)本、對(duì)照品的核酸裂解處理

用商品化（取得科研許可證）的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本，具體操作參見(jiàn)該試劑盒說(shuō)明書(shū)。

或用Trizol法提取，方法如下：取100?l樣品置于1.5ml 離心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100?l氯仿，混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次； 13000rpm離心15min，吸取上層液體，加入等體積異丙醇，顛倒混勻室溫靜置10min， 13000rpm離心10min，輕輕倒去上清；加入700?l 75%乙醇，顛倒洗滌，13000rpm離心5min，輕輕倒去上清，倒置于吸水紙上，棄盡液體或4000rpm離心5sec，將管壁上的殘余液體甩到管底部，用微量加樣器盡量吸干液體，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。

2.試劑配制

取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測(cè)混合液與n×1?l RT-PCR酶（n為反應(yīng)管數(shù)）,振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。

3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中，然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽(yáng)性對(duì)照品各5?l分別加入PCR管中，蓋好管蓋，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

4. PCR擴(kuò)增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上，*循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循環(huán)45次;單點(diǎn)熒光檢測(cè)在60℃，反應(yīng)體系為25?l。

熒光通道檢測(cè)選擇：選用FAM通道。

備注：如使用ABI系列PCR儀，請(qǐng)務(wù)必于passive reference 和 quencher處均選擇“none”。

5. 閾值設(shè)定

閾值設(shè)定原則以閾值線(xiàn)剛好超過(guò)DEPC-H2O的zui高點(diǎn)。

6. 質(zhì)量控制：試劑盒各對(duì)照品須達(dá)到以下要求，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

Ct值
FAM通道（檢測(cè)H7）		HEX/VIC/JOE（檢測(cè)N9）
DEPC-H2O	UNDET或45		UNDET或45
陽(yáng)性對(duì)照品	≤35		≤35

7. 試驗(yàn)結(jié)果的判斷

通道	Ct值		結(jié)果判斷
1	FAM+HEX	UNDET或45	樣本低于檢測(cè)限，報(bào)告為陰性
2	FAM+HEX	≤43	FAM通道為H7基因陽(yáng)性； HEX/VIC/JOE通道為N9基因陽(yáng)性
3	FAM+HEX	43～45	復(fù)檢一次,如仍為43～45,則報(bào)告為陰性

進(jìn)行定量檢測(cè)時(shí)，儀器生成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)后，自動(dòng)顯示待檢樣品定量值。

【參考值范圍】陰性（檢測(cè)對(duì)象H7N9為病原微生物，在健康人體中不存在）。

【對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染，試劑污染，樣品交叉污染會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果。

【檢驗(yàn)方法的局限性】當(dāng)檢測(cè)樣本中被檢核酸濃度含量低于zui低檢測(cè)限5×103copies/ml時(shí)可能會(huì)發(fā)生假陰性的結(jié)果。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】zui低檢測(cè)限：1×103copies/ml；

【注意事項(xiàng)】開(kāi)始檢測(cè)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)全文。

1. 整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格分在三區(qū)進(jìn)行：PCR反應(yīng)體系的配制區(qū)；標(biāo)本處理、加樣區(qū)；PCR擴(kuò)增、熒光檢測(cè)及結(jié)果分析區(qū)。各區(qū)使用的儀器、設(shè)備、耗材和工作服應(yīng)獨(dú)立。實(shí)驗(yàn)后即請(qǐng)清潔工作臺(tái)，并進(jìn)行消毒。

2. 使用不含熒光物質(zhì)的一次性手套（經(jīng)常替換）、一次性離心管、自卸式移液器和帶濾嘴吸頭。

3. 試劑準(zhǔn)備和標(biāo)本處理應(yīng)使用超凈工作臺(tái)（負(fù)壓式）或防污染罩，以防止對(duì)環(huán)境污染。

4. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照品。

5. 操作人員應(yīng)經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，具有一定經(jīng)驗(yàn)和操作技能。

6. 操作臺(tái)、移液器、離心機(jī)、PCR擴(kuò)增儀等儀器設(shè)備應(yīng)經(jīng)常用10%次氯酸或75%酒精、紫外線(xiàn)燈或臭氧消毒處理。

7. 實(shí)驗(yàn)中接觸過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的廢棄物品（如吸頭）、擴(kuò)增完畢的離心管、標(biāo)本等應(yīng)進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。

8. 試劑使用前應(yīng)在常溫下充分融化并混勻。

9. PCR反應(yīng)混合液應(yīng)避光保存。

10. 反應(yīng)管中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊。

11. 不同批號(hào)的試劑請(qǐng)勿混用，請(qǐng)?jiān)谟行趦?nèi)使用試劑盒。

【公司名稱(chēng)】廣州健侖生物科技有限公司

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【電子郵件】 Service@jianlun.com Jim@jianlun.com
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H7N9型禽流感是一種新型禽人感染H7N9禽流感疫情防控方案（*版）衛(wèi)生部《人感染H7N9禽流感疫情防控方案（*版）》已確定了PCR核酸檢測(cè)作為H7N9禽流感確診手段。據(jù)悉2013年4月2日，國(guó)家CDC 已經(jīng)啟動(dòng)物流程序，將檢測(cè)H7N9禽流感病毒的核酸檢測(cè)PCR試劑探針及引物下發(fā)至各地方 CDC和各個(gè)診斷實(shí)驗(yàn)室，以保證H7N9的準(zhǔn)確診斷。流感，于2013年3月底在上海和安徽兩地*發(fā)現(xiàn)， 4月2日江蘇又報(bào)告4例確診病例。此次人感染的H7N9禽流感病毒是*發(fā)現(xiàn)的亞型流感病毒，尚未納入我國(guó)法定報(bào)告?zhèn)魅静”O(jiān)測(cè)報(bào)告系統(tǒng)，目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)針對(duì)H7N9禽流感病毒的疫苗。

世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定，禽流感病毒的檢測(cè)采用雞胚病毒分離培養(yǎng)及致病力測(cè)定。中華人民共和國(guó)*和*已聯(lián)合發(fā)布8項(xiàng)有關(guān)禽流感病毒檢測(cè)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中，通用的《禽流感病毒通用熒光ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)方法》和針對(duì)H7亞型的《Ｈ７亞型禽流感病毒熒光ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)方法》都是基于核酸檢測(cè)的原理。熒光ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)禽流感病毒系列方法，是利用分子生物學(xué)手段，檢測(cè)高致病性禽流感病毒核酸，無(wú)須做雞胚病毒分離培養(yǎng)，可將檢測(cè)時(shí)間從原來(lái)的２１天縮短為４個(gè)小時(shí)。

核酸檢測(cè)（nucleic acid testing，NAT）是直接檢測(cè)病原體核酸的一系列技術(shù)的總稱(chēng)，可在尚未檢測(cè)到抗原或抗體前，先檢測(cè)到病毒核酸，其基本步驟包括核酸提取、擴(kuò)增和檢測(cè)。也就是常說(shuō)的基因檢測(cè)，是通過(guò)血液、其他體液或細(xì)胞對(duì) DNA進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)，可以診斷疾病，也可以用于疾病風(fēng)險(xiǎn)。由于核酸檢測(cè)是直接檢測(cè)病原體核酸，具有高敏感，高特異和短檢測(cè)窗口期等優(yōu)點(diǎn)，為疫病早診斷、早治療、降低病死率以及控制疫情爭(zhēng)取時(shí)間。核酸檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)從定性檢測(cè)發(fā)展到實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)。針對(duì)有些臨床需要，除能夠依據(jù)陰陽(yáng)性判斷確證病例以外還可以依據(jù)核酸的載量判斷感染程度。

根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，H7N9禽流感病毒的核酸檢測(cè)采用的熒光RT-PCR檢測(cè)需要實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀用于定量檢測(cè)，或PCR基因擴(kuò)增儀用于定性檢測(cè)，以及依據(jù)H7N9人感染禽流感的核酸特定序列研制的基于引物和探針的PCR檢測(cè)試劑盒。
據(jù)悉2013年4月2日，國(guó)家CDC 已經(jīng)啟動(dòng)物流程序，將檢測(cè)H7N9禽流感病毒的核酸檢測(cè)PCR試劑探針及引物下發(fā)至各地方CDC和各個(gè)診斷實(shí)驗(yàn)室，以保證H7N9的準(zhǔn)確診斷。

廣州健侖生物科技科技有限公司（www.jianlun.com）10多年來(lái)一直專(zhuān)注核酸檢測(cè)，PCR基因擴(kuò)增儀，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀等儀器和試劑的研制，在國(guó)家重點(diǎn)科技計(jì)劃等項(xiàng)目的支持下已有多個(gè)產(chǎn)品獲得科研注冊(cè)證，成為SARS、H1N1等疾病的法定檢測(cè)設(shè)備，這些儀器和試劑產(chǎn)品都是進(jìn)行H7N9禽流感病毒核酸檢測(cè)的*內(nèi)容。

關(guān)鍵詞：工作臺(tái) 移液器超凈工作臺(tái) 離心機(jī) 擴(kuò)增儀

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