日本腦炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）是流行性乙型腦炎（簡稱乙腦）的病原體。乙腦是嚴(yán)重威脅人畜健康的一種急性傳染病，可引起母豬流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)，病死率高。豬感染JEV病毒后，在血清中能檢測到特異性抗體。因此檢測特異性豬乙腦抗體，可作為豬場乙腦疫苗的免疫監(jiān)測及該病輔助檢測指標(biāo)。
本試劑盒采用ELISA方法檢測豬血清中的特異性抗體。本試劑盒靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好，操作方便快速，可分多次使用。
【試劑組成】
| 1.預(yù)包被板 | 48T/96T; | | 7. 終止液（6號液） | 1支; |
| 2.酶結(jié)合物（1號液） | 1支; | | 8. 陽性對照品 | 1支; |
| 3.濃縮洗滌液（2號液） | 1支; | | 9. 陰性對照品 | 1支; |
| 4.底物（3號液） | 1支; | | 10.不干膠膜 | 1/2片; |
| 5.顯色劑（4號液） | 1支; | | 11.自封袋 | 1個; |
| 6.*（5號液） | 1支; | | 12.使用說明書 | 1份; |
【操作程序】
1．洗滌液配制用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號液）按1：10稀釋，如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液。
2．樣本稀釋 用*（5號液）將待檢血清樣本按1：100稀釋，如取5ul樣本與495ul*，混勻。陰性、陽性對照品不用稀釋，直接加樣。
3．加樣反應(yīng) 每次試驗設(shè)陰性對照2孔、陽性及空白對照各1孔（分別加入陰性、陽性對照及*100ul）。樣本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本100ul。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘后再甩凈，拍干。
4．加酶反應(yīng) 除空白對照孔外，每孔加酶結(jié)合物（1號液） 1滴。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。
5．顯色反應(yīng) 加底物液（3號液）和顯色劑（4號液）各1滴，混勻，37℃避光顯色10分鐘。加終止液（6號液）1滴，終止反應(yīng)（加終止液后，藍色會變?yōu)辄S色）并判讀結(jié)果。
【結(jié)果判斷】
陰性對照呈無色或淺黃色，陽性對照呈明顯黃色，表示試驗有效。
以空白對照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度（A值）。待檢孔A值大于陰性對照A值平均值的2.1倍者判為陽性。如陰性對照A值的平均值低于0.08時按0.08計算。
【注意事項】
1.試劑盒于2-8℃保存，有效期6個月。每次使用前應(yīng)先平衡至室溫。
2.未使用完的板條應(yīng)密封保存。
3.試劑盒中終止液具有腐蝕性，要小心使用。
4.瓶蓋每次使用后要擰緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組份不可混用。
5.試驗樣本應(yīng)為無染菌、無血脂、無溶血的血清。任何樣本都應(yīng)視為傳染源妥善處理。
6. 37℃孵育時，建議使用水浴箱。如無條件，可在溫箱中放置濕盒進行反應(yīng)并同時用不干膠膜封蓋板孔。
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