瘧疾診斷試劑盒（膠體金法）使用說明書

            廣州健侖生物科技有公司是*的診斷試劑供應，健侖生物*為中國石化集團、中國石油集團、中國有色金屬集團、*駐蘇丹維和*、*駐剛果金維和*等十多大型跨國集團公司在非洲地區(qū)工作人員提供瘧疾體檢試劑卡。

該產(chǎn)品有美國*，獲得美國FDA證、歐盟CE認證、中國進口科研證已經(jīng)十多項，是擁有zui多認證的品牌，在范圍內(nèi)zui廣泛的擁有，及具有較高的口碑和聲譽。

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電子郵件：Service@jianlun.com

*鏈接：http://jianlun.com/product_view.asp?id=319

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：瘧原蟲抗原檢測試劑盒（膠體金法）

英文名稱：Binax NOW^ÒMalaria Test

【包裝規(guī)格】

25人份/盒。

【預期用途】

瘧原蟲抗原檢測試劑盒（膠體金法）是體外免疫層析試驗，用于定性檢測具有瘧疾癥狀和體征人群EDTA抗凝靜脈血或毛細血管血中的惡性瘧原蟲抗原和間日瘧原蟲抗原，可對惡性瘧原蟲、間日瘧原蟲做出輔助診斷，并可對惡性瘧原蟲和間日瘧原蟲做出鑒別診斷。

該試驗不用于無癥狀人群的篩查。

【檢驗原理】

瘧原蟲抗原檢測試劑盒（膠體金法）使用的是薄膜免疫層析技術(shù)，該技術(shù)用單克隆抗體檢測靜脈血和末梢血中的惡性瘧原蟲抗原和間日瘧原蟲抗原，這兩種抗體與對照抗體固定到膜支持物上形成三條不同的線，膜支持物與樣品墊相連，結(jié)合有可視粒子的對照抗體和抗瘧原蟲抗體浸滲在樣品墊上，組成檢測條。檢測條位于一塊書形鉸鏈狀的檢測卡中，與沖洗墊和吸收墊一道參與檢測板閉合后薄膜的清洗。

檢測時，將全血加到樣品墊上，標本中存在的瘧原蟲抗原與抗瘧原蟲抗體結(jié)合物結(jié)合。將A試劑液加到檢測條的底部，使抗原結(jié)合物復合物沿檢測條流動，在固定抗體處被捕獲，形成檢測線，固定的對照抗體捕獲對照結(jié)合物，形成對照線。一旦血標本流過檢測條，就將檢測板閉合，使加到?jīng)_洗墊中的A試劑把檢測條上多余的血液沖去。

檢驗結(jié)果可用紫紅色線的存在與否來解釋。15分鐘讀數(shù)時，陽性結(jié)果將包括一條檢測線（或兩條檢測線）和一條對照線，陰性結(jié)果只產(chǎn)生一條對照線，陰性表明標本中未檢出瘧原蟲抗原。如果不出現(xiàn)對照線，不管檢測線出現(xiàn)與否，結(jié)果都為無效。

【主要組成成份】

1.     檢測卡

2．A試劑：含去污劑和疊氮鈉的Tris緩沖液。

3．毛細管：EDTA抗凝毛細管，用于將末梢全血加入到檢測卡中。

自備材料

*、滅菌拭子或棉球、時鐘、秒表或跑表

注：加樣時，要使用能加樣15μl體積的經(jīng)過校準的加樣器。

【儲存條件及有效期】

試劑盒在2-37℃貯藏。

試劑有效期為自生產(chǎn)之日起24個月。

試劑在滿足貯藏條件的情況下可穩(wěn)定使用至效期（效期標注在外包裝和試劑盒內(nèi)）結(jié)束。

【樣本要求】

EDTA抗凝的新鮮全血。手指血要立即測試，靜脈血可于2-30℃保存3天，但測試前須平衡至室溫（15-30℃），并*混勻。

【檢驗方法】

樣本采集和處理：

用標準的靜脈血采集程序采集靜脈血，注入EDTA抗凝管中。全血樣品采集后要盡快測試，如果不能馬上進行操作，可將血液在2-30℃保存3天。如果血液被冷藏，測試前將之平衡至室溫（15-30℃），并輕輕混勻。

手指穿刺留取毛細血管血時，用無菌拭子或紗巾將采血區(qū)擦凈，風干，用*刺破皮膚，把血液直接收集在EDTA毛細管中，注滿，立即使用。

檢測前確保所有標本都平衡至室溫。

檢測步驟：

檢測前從包裝袋中取出檢測板。打開包裝，把它平放在工作臺面上。

①如果使用毛細血管血，慢慢將微量毛細管中的血液加到檢測板右側(cè)的整個紫色樣品墊上。加樣時將毛細管垂直持放，在樣品墊的幾個部位加樣，一旦樣品墊達到飽和，就可將毛細管丟棄處理，本試驗未必需要毛細管中收集的全部血液。到步驟2。

如果使用的是靜脈血標本，用加樣頭在血液中吸排幾次，然后慢慢加入15μl血液，打到紫色樣品墊上。到步驟2。

重要提示：加樣不正確可導致結(jié)果無效或結(jié)果無法解釋。

②緊靠紫色樣品墊的下邊有一個白色墊，垂直加2滴A試劑到白色墊上，第2滴須在*滴被墊吸收后方可加入。不要把A試劑直接加在紫色墊上。

③讓血標本流經(jīng)整個檢測條，但不要使血液溢出或低于檢測條上部的吸收墊，因為這樣會影響檢測條的*沖洗效果。

注意：如果1分鐘后檢測條上的血流阻斷或流動不到條的1/2，可再加一滴A試劑到檢測條下部的白墊上（位于加血的標本墊下方）。

④在血標本到達檢測條上部的白色吸收墊底部前，慢慢向檢測板左上方的沖洗墊中加入4滴A試劑，當前一滴吸收后，才能加下一滴。注意：第三滴和第四滴可能不能被*吸收。

⑤當標本到達檢測條上部白色吸收墊底部的時候，從檢測板右邊將粘附襯揭去，閉合檢測板。這可使A試劑將血標本從檢測條上沖去。為確保檢測板閉合良好，試驗流暢，用力按壓結(jié)果窗口的右邊緣。

⑥閉合檢測板15分鐘后從視窗中讀取結(jié)果。不足15分鐘或大于15分鐘讀取的結(jié)果可能不正確。

注：讀結(jié)果時，如有必要可將檢測板傾斜以減經(jīng)結(jié)果窗口中耀眼的光線。

【參考值（參考范圍）】

對惡性瘧原蟲的zui低檢測限是1001-1500個寄生蟲/微升。

對間日瘧原蟲的zui低檢測限是5001-5500個寄生蟲/微升。

【檢驗結(jié)果的解釋】

有效試驗結(jié)果

對照線（C）會出現(xiàn)在所有有效試驗中，當存在對照線時，試驗結(jié)果可如下解釋。注：出現(xiàn)的任意檢測線，即使顏色非常淺淡，也解釋為陽性結(jié)果。

無效和/或無法解釋的試驗結(jié)果

如果對照線不出現(xiàn)，不管檢測線出現(xiàn)與否結(jié)果都是無效的。

15分鐘時，如果背景色妨礙讀數(shù)，結(jié)果無法解釋。標本或A試劑的加入方法不正確可導致試驗無效或試驗結(jié)果無法解釋。用新檢測板重新檢測前，請查閱檢測步驟部分和預防措施＃5。如果問題仍無法解決，請與技術(shù)部門。

【檢驗方法的局限性】

陰性試驗結(jié)果不能排除瘧疾感染，特別是寄生物在低水平時，因此，用BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒獲得的結(jié)果必須與其他化驗結(jié)果和臨床檢查相結(jié)合以做出準確診斷。這一點在顯微鏡檢查中經(jīng)常用到，再收集一份標本，再測一次³。

BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒既可檢測活瘧原蟲抗原也可檢測死瘧原蟲抗原，包括配子細胞⁴和隨后產(chǎn)生的裂殖體⁵。檢測依賴于標本中的抗原載量，可能與顯微鏡對同一份標本的檢查無直接相關(guān)性。

BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒尚不能用于監(jiān)測瘧疾的治療效果，因為用抗瘧疾藥物將瘧原蟲殺滅后幾天內(nèi)仍可檢出瘧原蟲抗原⁴。

類風濕因子陽性的標本在BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒中可能出現(xiàn)假陽性。類風濕因子是一種自身抗體，類風濕因子陽性與急性自身免疫病，如類風濕性關(guān)節(jié)炎、慢性病毒性感染（如，病毒性肝炎）、寄生蟲感染有關(guān)⁶。此外，在正常人群中有1-4％的人類風濕因子陽性⁷。同其他瘧原蟲抗原快速檢測試驗一樣，BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對類風濕因子陽性個體標本也產(chǎn)生假陽性（見操作特性部分）。

該試驗不用于無癥狀人群的篩查。

【產(chǎn)品性能指標】

預期值

瘧疾是一種嚴重的寄生蟲病，是熱帶亞熱帶地區(qū)危害健康的主要因素之一。瘧原蟲的陽性檢出率受多種因素影響，包括標本采集方法、檢驗手段、地理位置和疾病在特定區(qū)域的流行性。惡性瘧原蟲感染被認為是zui兇險的，而間日瘧原蟲很少有致命性。

2001年，在瘧疾地方流行區(qū)域進行了一項臨床研究。在有癥狀病人中，惡性瘧疾（用顯微鏡檢查進行了確定）平均占14％，間日瘧疾平均占29％，惡性瘧與間日瘧的混合感染占的比例非常低。

2005－2006年在美國東部進行了一項多層研究，從發(fā)熱和有發(fā)熱史的住院和門診病人（這些病人住在很少發(fā)生瘧疾的地區(qū)，被看作是瘧原蟲陰性病人）中收集了217份全血標本，用BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒進行檢測，結(jié)果216（99.5%）人陰性。

操作特性

臨床標本特性－BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒敏感性和特異性－地方流行人群：

2001年在美國國外瘧原蟲流行地區(qū)進行了一個多中心前瞻性研究，研究中將BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒與吉姆薩染色顯微鏡技術(shù)進行了比較。從帶有瘧原蟲樣癥狀的病人中采集了4,122份全血標本用BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒評價。由于瘧原蟲的無性形式（非配子體）表示有感染，因此，顯微鏡檢查只有檢查到瘧原蟲的無性形式才能視為陽性。

測試人群中44%的人（1,796/4,122）用顯微鏡檢查為瘧疾陽性，其中有557個病人為惡性瘧、1,187個人為間日瘧，34個人為惡性瘧/間日瘧混合感染。59％的人為男性，41％的人為女性。19％的人為兒童（＜18歲），81％的人為成人（＞18歲）。BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對單種瘧原蟲和惡性瘧/間日瘧混合感染的性能概述如下。

BinaNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒的試驗性能在病人的年齡和性別方面沒有差異，BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對惡性瘧的特異性在5％接受過抗瘧藥物治療的病人中（89.4%）較之未治療的病人（94.4%）有少許下降，但無統(tǒng)計學差異。

在整個研究人群中，BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對低紅細胞壓積和高紅細胞壓積樣本的試驗性能是等同的。

對惡性瘧原蟲感染的檢測

BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒和顯微鏡檢查對惡性瘧原蟲的敏感性和特異性情況如下所示。對敏感性的評價基于顯微鏡檢查中觀察到的寄生物血癥水平（每微升的寄生蟲量）。

BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒與顯微鏡檢查在惡性瘧原蟲敏感性和特異性方面的比較

惡性瘧的敏感性

惡性瘧的特異性

間日瘧原蟲感染的檢測

BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒和顯微鏡檢查對間日瘧原蟲的敏感性和特異性情況如下所示。對敏感性的評價基于顯微鏡檢查中觀察到的寄生物血癥水平（每微升的寄生蟲量）。有68份標本顯微鏡檢查僅間日瘧原蟲陽性，用BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒檢查卻出現(xiàn)了兩條檢測線。如果這些結(jié)果也記錄在陽性之列，BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對間日瘧原蟲測定的總敏感性從68.9%提高到74.6%（886/1,187）。

與顯微鏡法相比，BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對間日瘧原蟲的敏感性和特異性

對間日瘧原蟲的敏感性

對間日瘧原蟲的特異性

惡性瘧和間日瘧的檢測限：

在上述研究中，經(jīng)確定BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對惡性瘧的臨床檢測限（LOD）（定義為95％的檢測次數(shù)產(chǎn)生陽性結(jié)果的寄生蟲血癥水平）為1001－1500個寄生蟲/微升，對間日瘧的檢出限為5001－5500個寄生蟲/微升。

樣品的臨床性能－BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒在流行人群中對指血和靜脈血的敏感性和特異性：

2003年在美國國外瘧疾流行區(qū)域進行了一項前瞻性研究，該研究用靜脈血和指血對BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒的性能與吉姆薩顯微鏡法進行了比較。BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒評估的全血采自787位有瘧疾癥狀的病人的靜脈和指尖。由于無性體（非配子體）表示有感染，顯微鏡檢查只有查到無性體方可視為陽性。

用BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒和顯微鏡法對782份靜脈血標本和784份指尖血標本進行分析，BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒相對顯微鏡法對惡性瘧和間日瘧的敏感性和特異性如下：

與顯微鏡法相比，BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對靜脈血和指尖血中惡性瘧和間日瘧的敏感性和特異性

樣本的臨床特性－BinaxNOWR瘧疾試驗特異性－非流行人群：

2006-2007年在美國東部進行了一項前瞻性研究，該研究對BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒的性能與吉姆薩染色鏡檢進行了比較。對100份取自發(fā)熱病人的血標本用BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒和顯微鏡法進行了評估。100份樣品中，顯微鏡檢查結(jié)果全為陰性，BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒中99例陰性，特異性為99％（99/100）。與顯微鏡法相比，BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒的特異性如下：

分析反應性：

兩種感染人體的瘧原蟲（惡性瘧原蟲、間日瘧原蟲）在下列濃度時在BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒中檢測陽性。

分析特異性（交叉反應性）：

為了確定BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒的分析特異性，對28種血中可能存在的病原微生物（7種細菌，5種原生生物，16種病毒）進行了檢測。在下列濃度時檢測全為陰性。

 來自血液外源成分的干擾:

下列物質(zhì)可為人為引入血液中,用BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒進行評估,在下列濃度時未發(fā)現(xiàn)對試驗性能造成影響。注：這些藥物對BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒的分析效應是通過采集全血，加入高治療濃度量藥物，然后再對這些樣品進行測試而進行研究的。這些藥品的代謝物對試驗的影響未進行研究。

**也用作抗菌素，用量通常比本測試研究要低的多。

血液內(nèi)源性成分的干擾：

根據(jù)CLSI EP7導則，對高水平的血液中的內(nèi)源性成分可能對BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒造成的干擾進行了評估。對EDTA抗凝全血中高于生理水平的血紅蛋白、蛋白、血紅素（結(jié)合型和未結(jié)合型）和油三酯進行了測試，所有這些血液內(nèi)源性成分均未對試驗性能造成影響。

無關(guān)醫(yī)學情況的干擾：

為了評價無關(guān)醫(yī)學情況對BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒特異性的影響，對病情與瘧疾無關(guān)受試者的116份標本進行了測試，只有5例出現(xiàn)假陽性結(jié)果，其中4例受試者類風濕因子陽性，1例受試者人抗鼠抗體（HAMA）陽性。

此外，用BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對20份白細胞水平處于24－87×10⁶/ml的血液標本進行了評估，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對試驗性能無影響。

重復性研究

在3家獨立的場所對含有惡性瘧原蟲和間日瘧原蟲的陰性、檢出限、弱陽性的標本隨機編號分組，用BinaxNOW^®瘧原蟲抗原檢測試劑盒進行單盲研究，參與者在3天中對每份標本檢測多次，結(jié)果符合率為97％（140/144），批內(nèi)（由一個操作者重復測定）、批間（3天間）、室間（3個地點）、操作者間（6個操作者）無顯著性差異，每種類型樣品的檢測百分率概述如下。

惡性瘧和間日瘧樣品的檢測百分率

*有1個操作者將1例陰性樣品檢為陽性。

【注意事項】

1．   用于體外診斷。

2．   檢測前將檢測卡密封保存。

3．   不要使用超過有效期的試劑盒。

4．   不要將不同批號試劑混合使用。

5．   為了取得*標本流量，優(yōu)化試驗過程，加標本和A試劑時要照試驗步驟操作。向檢測卡上加A試劑時要注意下列問題：

a.     將A試劑瓶垂直置于檢測卡墊的上方1至2.5厘米處，慢速自由滴入試劑，以使加到?jīng)_洗墊和吸收墊上的試劑量合乎需要。

b.     在將A試劑加到紫色標本墊正下方的白色墊上時，需待*滴試劑*被墊吸收后方可加第二滴，必要時可加入第三滴－見操作步驟3。

6．   如果用的是靜脈血，要輕扣試管或小瓶將標本混勻。吸樣前，將標本在加樣頭中來回吸排幾次。

7．   如果用的是末梢血，要使用試劑盒中提供的微量毛細管加樣。

8．   病人標本和檢測卡要視為傳染性物質(zhì)，按血液傳染源的預防措施處理，不要再次開封和使用檢測卡。

9．   空氣循環(huán)過度（即：空調(diào)、風扇等）可減慢標本的流速，建議不要在流速過大的環(huán)境中測試標本。

10.  解釋結(jié)果時，使用明亮未過濾的光源。

11.    所有毛細管和吸頭都是一次性的，不要多份標本合用。加樣設備、容器或試劑的污染可導致結(jié)果不準確。

12.    A試劑用疊氮鈉做防腐劑，疊氮鈉有毒，應小心處理，不要誤吸或與皮膚接觸。它可與鉛或銅反應形成爆炸性的金屬氮化物。接觸后要用大量清水沖洗。

【參考方獻】

1.     Breman, J.G., M.S. Alilio, and A. Mills. Conquering the intolerable burden of malaria: what’s new, what’s needed: a summary. American J. of Tropical Medicine and Hygiene, 2004; 71 （Suppl 2） 1-15.

2.     Center for Disease （CDC）. Treatment of Malaria （Guidelines for Clinicians）, June 28, 2004.

3.     Manual of Clinical Microbiology. 8^th Endition,2003 “Plasmodium and Babesia”. pp. 1944-59.

4.     Tjitra, Emiliana, S. Suprianto, J. McBroom, B.J. Currie, and N.M.Anstey. Persistent ICT Malaria P.f./P.v. Panmalarial and HRP2 Antigen Reactivity after Treatment of Plasmodium falciparum Malaria Is Associated with Gametocytemia and Results in False-Positive Diagnoses of Plasmodium vivax in Convalescene. J. of Clinical Microbiology, March 2001; 39: 1025-1031.

5.     Moody. Anthony. Rapid Diagnostic Tests for Malaria Parasites. Clinical microbiology Reviews, Jan. 2002; 15:66-78.

6.     Lqbal, J., A. Sher, and A.Rab. Plasmodium falciparum Histidine-Rich Protein 2-Based Immunocapture Diagnostic Assay for Malaria: Cross-Reactivity with Rheumatoid Factors.J. of clinical Microbiology, March 2000;38: 1184-1186.

7.     Review Criteria for Assessment of Rheumatoid Factor （Rf） in vitro Diagnostic Devices Using Enzyme-Linked Immunoassay（EIA）, Enzyme Linked Immunosorbent Assay （ELISA）, Particle Agglutination Tests, and Laser and Rate Nephelometry, FDA Guidance Document; February 21,1997.

8.     Lysenko, A. JA. And A. E. Beljaev. An Analysis of the Geographical Distribution of Plasmodium ovale. World Health Organization Bulletin, 1969; 40:383-394.

9.     Collins, W.E., and G. M. Jeffery. Plasmodium ovale: Parasite and Disease. Clinical Microbiology Reviews, July 2005; 18:570-581.

售后服務單位：

【公司名稱】廣州健侖生物科技有限公司

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【科研注冊證書編號】

國食藥監(jiān)械（進）字2009第3401705號

【產(chǎn)品標準編號】

YZB/USA1008-2009

【說明書批準及修改日期】

2011年3月14日