產(chǎn)品咨詢(xún)：
德國(guó)拜發(fā) R-Biopharm ELISA KITS試劑盒 酶聯(lián)免疫法定量檢測(cè)* M1
RIDASCREEN® Aflatoxin M1 30/15
體外診斷試劑
儲(chǔ)存溫度 2 - 8 °C
產(chǎn)品咨詢(xún)：
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
RIDASCREEN® Aflatoxin M1 30/15* M1 檢測(cè)試劑盒，采用競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫法定量測(cè)定奶類(lèi)、奶粉和奶酪中的* M1 的含量。
試劑盒中含有酶聯(lián)免疫檢測(cè)所需的所有試劑，包括標(biāo)準(zhǔn)品。
試劑盒足夠進(jìn)行96次檢測(cè)（包括標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定）。
定量分析需要使用微孔板酶標(biāo)儀。
樣品處理：
奶類(lèi)樣品：脫脂
奶粉樣品：溶解，脫脂
奶酪樣品：提取，離心
檢測(cè)時(shí)間： 樣品制備（以10個(gè)樣品為例）
奶類(lèi)和奶粉樣品 ...........................................約 0.5小時(shí)
奶酪樣品.........................................................約 2小時(shí)
檢測(cè)過(guò)程（孵育時(shí)間）.........................................1小時(shí)
檢測(cè)限： 奶類(lèi)樣品：.............................................................5 ppt
奶粉樣品（相對(duì)于溶解后的液態(tài)樣品）：..............5 ppt
奶粉樣品（相對(duì)于溶解前的粉制樣品）：............50 ppt
奶酪樣品：.......................................................... 50 ppt
回收率： 在人工添加的全脂奶樣品中
（10 - 80 ppt）：..............................................約95 %
（變異系數(shù)：約14 %）
奶粉樣品：........................................................約95 %
奶酪樣品：..................................................... 約102 %
（變異系數(shù)約11 %）
特異性： RIDASCREEN® Aflatoxin M1 30/15 * M1 檢測(cè)
試劑盒的特異性根據(jù)與相關(guān)霉菌毒素的交叉反應(yīng)確定。
* M1 .................................................... 100 %
* M2 ...................................................... 30 %
1. 用途
RIDASCREEN® Aflatoxin M1 30/15* M1 檢測(cè)試劑盒，采用競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫法定量測(cè)定奶類(lèi)、奶粉和奶酪中的* M1 的含量。
2. 概要
*是由霉菌 Aspergillus flavus 及 Aspergillus parasiticus 產(chǎn)生的致癌的高毒性代謝產(chǎn)物。* M1，即所謂的牛奶*是* B1 的代謝產(chǎn)物，它隱藏于由食用了含* B1 的飼料的奶牛所產(chǎn)的牛奶中。
* M1 能在常規(guī)的巴氏法消毒后繼續(xù)存活，故其是生產(chǎn)原材料樣品和成品的必檢項(xiàng)目。
1999年 1月起歐盟范圍內(nèi)規(guī)定了*殘留*。其中* M1 的殘留*值為 0.05 µg/l （50 ppt）。
3. 檢測(cè)原理
檢測(cè)的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)。微孔板包被有特殊的* M1 抗體。加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液和在洗滌步驟后加入的酶標(biāo)記* M1 （酶連接物）。游離的* M1 和酶連接物競(jìng)爭(zhēng)抗體結(jié)合位點(diǎn)（競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫分析）。沒(méi)有結(jié)合的酶連接物在洗滌步驟中被除去。
在孔中加入底物/發(fā)色劑，結(jié)合的酶連接物將發(fā)色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色。加入反應(yīng)終止液后顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在 450 nm處測(cè)量，吸光度值與樣品中的* M1 濃度成反比。
4. 試劑盒組份
每一個(gè)盒中的試劑足夠進(jìn)行 96次檢測(cè)（包括標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定）。盒中的組份如下：
1 x 96孔微孔板（12條每條8孔）
包被有針對(duì)* M1 的抗體
6 x 標(biāo)準(zhǔn)品（每瓶1.3 ml）
0 ppt（零標(biāo)準(zhǔn)品），5 ppt， 10 ppt， 20 ppt， 40 ppt， 80 ppt
含有* M1 的奶緩沖液
1 x 酶連接物（1.3 ml）..........................................................................紅色瓶蓋
過(guò)氧化物酶標(biāo)記的* M1
濃縮液
1 x 底物/發(fā)色劑（10 ml）................................棕色瓶蓋紅色，含有四甲基聯(lián)苯胺
1 x 反應(yīng)終止液（14 ml）..................................
含1 N 的硫酸
1 x 緩沖液1（20 ml）
樣品稀釋緩沖液
1 x 緩沖液2（12 ml）............................................................................白色瓶蓋
酶連接物稀釋緩沖液
1 x 洗滌緩沖液（鹽）
用于制作 10 mM 的磷酸緩沖液，pH 7.4
含有0.05 % Tween 20
5.另需的試劑和設(shè)備
5.1. 設(shè)備：
− 微孔板酶標(biāo)儀（450 nm）
− 離心機(jī)
− 巴氏吸液管
− 刻度移液管
− 可調(diào)式20 µl - 200 µl 和 200 - 1000 µl 微量移液管
− 僅用于奶酪樣品
− 振蕩器
− 蒸發(fā)器
5.2. 試劑：
− 僅用于奶酪樣品
− 甲醇
− n - 庚烷
− 二氯甲烷
− PBS - 緩沖液，pH 7.2：0.55 g NaH2PO4 x H2O + 2.85 g Na2HPO4 x 2 H2O + 9
g NaCl，加蒸餾水至1000 ml
6. 操作者應(yīng)該注意之事項(xiàng)
標(biāo)準(zhǔn)品中含有* M1，應(yīng)特別小心。避免皮膚接觸（使用手套）。
玻璃器具和有毒溶液用次氯酸鈉溶液（10 % （v/v））浸泡消毒過(guò)夜（用 HCl 調(diào)節(jié)
溶液 PH 值為7） 。
反應(yīng)終止液為1 N 硫酸（R36/38， S2-26）。
7. 儲(chǔ)存條件
保存試劑盒于 2 - 8 °C，不要冷凍。
將不用的微孔板放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封儲(chǔ)存于 2 - 8 °C條件下。
*對(duì)光敏感，因此標(biāo)準(zhǔn)品要避免直接暴露在光線(xiàn)下。
底物/發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線(xiàn)下。
對(duì)過(guò)了有效期（見(jiàn)試劑盒標(biāo)簽）的試劑盒不再提供任何質(zhì)量保證。
不能交叉使用不同批號(hào)的盒中試劑。
8. 試劑變質(zhì)的跡象
− 紅色的底物/發(fā)色劑在使用前發(fā)現(xiàn)顏色變藍(lán)
− 零標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值小于0.6 （E450 nm < 0.6）
9. 樣品處理
樣品應(yīng)當(dāng)冷藏保存。
9.1.奶類(lèi)樣品
−用冷凍離心機(jī)在10 min / 3500 g / 10 °C 條件下去除脂肪（如果沒(méi)有冷凍離心機(jī)，必須在離心前將樣品冷卻到 10 °C）
−離心后可用巴氏吸液管*去除表面的奶油
−取脫脂牛奶用于檢測(cè)（每孔 100 μl） （稀釋倍數(shù)1）
直接處理方法
−取牛奶20ul 和180ul 緩沖液1混合（1： 10 的比例稀釋?zhuān)靠兹?00 µl 進(jìn)行檢測(cè)（稀釋倍數(shù)10）
9.2. 奶粉樣品
−稱(chēng)取10 g 奶粉樣品于燒杯中，加入去離子水至 100 ml
−攪拌5分鐘使其充分溶解
−然后按奶類(lèi)樣品進(jìn)行處理（參見(jiàn) 9.1）
9.3. 奶酪樣品
對(duì)采集的代表性樣品進(jìn)行粉碎和混合，不要加入任何液體。對(duì)于表面長(zhǎng)有霉菌的樣品去掉表面，因?yàn)槠鋾?huì)影響檢測(cè)結(jié)果。
− 稱(chēng)取 2 g 粉碎后的奶酪樣品于可密閉的玻璃容器中
− 加入 40 ml 二氯甲烷攪拌或者振蕩15分鐘提取
− 濾去懸浮物，取10 ml 濾液蒸干（微弱氮?dú)饬髦校?0 °C）
− 油狀殘留物用 0.5 ml 甲醇、0.5 ml PBS緩沖液（參見(jiàn) 5.2.）和1 ml 庚烷溶解、充分混合
− 離心：15 min / 2700 g / 15 °C
− *去除上層庚烷層
− 用巴氏吸液管小心吸出下層的部分甲醇-水溶液
− 其中的100 µl和400 µl緩沖液1混合（1：5的比例稀釋?zhuān)?，每孔?00 µl 進(jìn)行檢測(cè)
備注：
如果還需要繼續(xù)進(jìn)行稀釋?zhuān)褂镁彌_液 1（參見(jiàn) 4）
10. 檢測(cè)步驟
10.1. 檢測(cè)前的準(zhǔn)備
使用之前將所有試劑回溫至室溫（20 - 25 °C）。
*M1酶連接物（紅色瓶蓋的瓶子）為濃縮液。因?yàn)橄♂尩拿高B接物的弱穩(wěn)定性，所以應(yīng)嚴(yán)格根據(jù)用量用緩沖液 2 進(jìn)行稀釋。在使用酶連接物前要仔細(xì)地輕輕振搖。用緩沖液 2（白色瓶蓋瓶子）對(duì)酶連接物濃縮液按照 1:11（1+10）的比例進(jìn)行稀釋。（比如：400 µl 濃縮液+ 4 ml 緩沖液，足夠進(jìn)行4條微孔板條的檢測(cè)）。
洗滌緩沖液是 PBS-Tween 緩沖液，為此試劑盒中提供了一袋洗滌緩沖液鹽（參見(jiàn)4.）。使用1 l 蒸餾水溶解一袋洗滌緩沖液鹽制得洗滌緩沖液。制備好的洗滌緩沖液可在2 - 8 °C下保存大約 4 - 6周時(shí)間。
或者： 用100 ml蒸餾水溶解袋中的洗滌緩沖液鹽，得到10倍的洗滌緩沖液鹽濃縮液，此溶液能在室溫（20 - 25 °C）下儲(chǔ)存 8 - 12周。使用時(shí)，用9份蒸餾水溶解 1份此濃縮液得到洗滌緩沖液。
10.2. 檢測(cè)操作
仔細(xì)進(jìn)行洗板的操作非常重要。在使用中不要讓微孔出現(xiàn)干燥。
1. 將足夠標(biāo)準(zhǔn)品和樣品檢測(cè)所需數(shù)量的孔條插入微孔板架。記錄標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置。
2. 將100 µl 標(biāo)準(zhǔn)品或者按照步驟9處理后的樣品加入相應(yīng)的微孔中，均做兩個(gè)平行實(shí)驗(yàn)。充分混合后，在室溫下（20 - 25 °C）暗處孵育30分鐘。
3. 倒出孔中的液體，將微孔板架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打 3 次）以保證*除去孔中的液體。加入 250 μl 洗滌緩沖液（參見(jiàn) 10.1.）洗滌，上述操作重復(fù)進(jìn)行兩遍。
4. 然后向?qū)?yīng)的微孔中加入 100 µl 稀釋后的酶連接物溶液，小心用手震蕩混合后在室溫下（20 - 25 °C）避光孵育15分鐘。
5. 倒出孔中的液體，將微孔板架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打 3 次）以保證*除去孔中的液體。加入 250 μl 洗滌緩沖液（參見(jiàn) 10.1.）洗滌，上述操作重復(fù)進(jìn)行兩遍。
6. 向每一個(gè)微孔中加入 100 μl 底物/發(fā)色劑（棕色瓶蓋），充分混合后在室溫下（20 - 25 °C）暗處孵育15分鐘。
7. 向每一個(gè)微孔中加入 100 μl 反應(yīng)終止液（黃色瓶蓋），充分混合。在加入反應(yīng)終止液后 15分鐘內(nèi)于450 nm處測(cè)量吸光度值。
11. 結(jié)果評(píng)估
請(qǐng)使用R-Biopharm德國(guó)拜發(fā)公司專(zhuān)門(mén)為RIDASCREEN® 系列產(chǎn)品設(shè)計(jì)的應(yīng)用軟件
RIDA® SOFT Win（訂貨號(hào)：Z9999）來(lái)進(jìn)行結(jié)果分析。
關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)請(qǐng)參看試劑盒中附帶的質(zhì)保證書(shū)。
以下是沒(méi)有使用軟件的計(jì)算方法：
標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值（或樣品）
----------------------------- x 100 = % 吸光度比值
零標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值
吸光度值以百分比表示，因此零標(biāo)準(zhǔn)品等同于 100 %。計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品相應(yīng)的比值，并繪成一個(gè)與*M1 [ng/l] 相關(guān)的半對(duì)數(shù)坐標(biāo)系統(tǒng)的曲線(xiàn)圖。
為了真實(shí)反映*M1的濃度，從校正曲線(xiàn)上讀出的濃度值必須乘以相對(duì)應(yīng)樣品的稀釋倍數(shù)。按照說(shuō)明書(shū)中給出的方法進(jìn)行操作，可得到以下樣品稀釋倍數(shù)：
奶類(lèi)樣品........................................................................... 1
奶粉樣品（相對(duì)于溶解后的液態(tài)樣品） ............................ 1
奶粉樣品（相對(duì)于溶解前的粉制樣品） ............................ 10
奶粉樣品.......................................................10
【公司名稱(chēng)】 廣州健侖生物科技有限公司
【】
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【電子郵件】 Hong@jianlun.com
【騰訊 】
【公司】 www.lsbuy.com
【營(yíng)銷(xiāo)中心】 廣州市中山大道中358號(hào)東溪大廈B座511室
【公司地址】 廣州市天河區(qū)車(chē)陂第十五工業(yè)園一幢4067室
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