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登革熱IgM抗體檢測試劑盒

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更新時間：2017-05-23 03:42:09瀏覽次數(shù)：208次

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廣州健侖生物科技有限公司

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產(chǎn)品簡介

登革熱IgM試劑盒

詳細(xì)介紹

Panbio登革熱IgM抗體試劑盒
【】

產(chǎn)品編碼	產(chǎn)品名稱	應(yīng)用概述	規(guī)格	貨期
R-DEN03D	登革熱快速檢測試劑	用于登革熱的快速檢測	25T	現(xiàn)貨
E-DEN01P	登革熱早期ELISA檢測試劑盒	早期的登革熱檢測	96T	現(xiàn)貨
E-DEN01G	登革熱IgG間接ELISA檢測試劑盒	原發(fā)登革熱和血清轉(zhuǎn)化血清流行病學(xué)觀察	96T	現(xiàn)貨
E-DEN01M	登革熱IgM捕捉ELISA檢測試劑盒	原發(fā)登革熱檢測	96T	現(xiàn)貨
E-DEN02G	登革熱IgG捕捉ELISA檢測試劑盒	繼發(fā)登革熱檢測	96T	現(xiàn)貨
E-DEN01D	登革熱IgM&IgG聯(lián)檢ELISA檢測試劑盒	原發(fā)登革熱于繼發(fā)登革熱檢測	192T	現(xiàn)貨

應(yīng)用范圍

DENV Detect IgM Capture ELISA是一種用來檢測人是否感染登革熱病毒的ELISA檢測系統(tǒng)，它可以檢測出人血清中是否存在抗登革熱病毒源性重組抗原（DENVRA）的IgM抗體。此診斷實驗用于有登革熱發(fā)熱或是登革熱血熱臨床癥狀的病人檢測。陽性結(jié)果必須經(jīng)過蝕斑減少中和試驗（PRNT）或是根據(jù)CDC疾病診斷指南確證。
用于臍帶血檢測，新生兒測試，*，或是普通人群篩查的實驗特征性能還未建立。此試驗未經(jīng)FDA明確證明可用于血液或血漿捐獻(xiàn)者的檢測。
注意：試驗中需觀察西尼羅河或是其他病毒中的IgM是否會與登革熱試劑盒發(fā)生交叉反應(yīng)，如可能發(fā)生了交叉反應(yīng)，則視為警告狀態(tài)

實驗原理
DENV Detect IgM ELISA試劑盒是由一種酶聯(lián)擴(kuò)大的兩步法免疫檢測系統(tǒng)。在此實驗中，將登革熱陰性質(zhì)控、陽性質(zhì)控和未知濃度的血清樣品用樣品稀釋液稀釋，然后加入到包被了抗人IgM抗體的微孔中溫育，之后分別加入登革熱源性重組抗原DENVRA和正常細(xì)胞抗原（NCA）進(jìn)行溫育。溫育并洗板后，用HRP標(biāo)記的DEN特異性抗體處理。第二次溫育并洗板后，加入TMB底物液進(jìn)行溫育。之后再加入酸性終止液，450nm處測OD值可確定底物反應(yīng)的程度。當(dāng)高于一定數(shù)值時（臨界值），樣品的吸光度值可確定樣品中是否存在登革熱抗體。
注意：陰性質(zhì)控和弱陽性質(zhì)控以內(nèi)在質(zhì)控形式提供，其目的是為了監(jiān)測試劑盒成分的完整性。
試劑盒成分
登革熱IgM ELISA試劑盒提供了足夠做96個測試所需要的試劑。試劑盒成分如下：
登革熱檢測特定材料：
1）抗人IgM包被的包被板：帶板蓋的板架，包被有抗人IgM， 96孔，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
2）樣品稀釋液：1瓶，25ml，即用，含吐溫20的Tris-HCl緩沖液，0.05%的Proclin防腐劑和添加劑，用于試驗樣品，陽性和陰性質(zhì)控的稀釋，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定
3）即用型的登革熱重組性抗原（DENRA）：1瓶，3ml，含吐溫20的Tris-HCl緩沖液，＜0.05%的Proclin防腐劑，抗生素（0.0025-0.004% G418 硫酸鹽），登革熱重組抗原和添加劑， 2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
4）即用型正常細(xì)胞抗原（NCA）：1支，3ml，含吐溫20的Tris-HCl緩沖液，＜0.05%的Proclin防腐劑，COS-1細(xì)胞的上清， 2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
5）登革熱陰性質(zhì)控：1支，50ul陰性血清，登革熱陰性質(zhì)控可輔助監(jiān)測試劑盒的完整性。2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
6）登革熱IgM陽性質(zhì)控：1支，50ul含0.03%的proclin的陽性血清，登革熱陽性質(zhì)控可輔助監(jiān)測試劑盒的完整性。2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
7）10倍濃縮洗滌液：1瓶，120ml，含吐溫20的10倍濃縮的磷酸緩沖鹽，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
8）HRP標(biāo)記的即用型酶聯(lián)物，1瓶，6ml，HRP標(biāo)記的黃熱病毒活性單克隆抗體，含吐溫20的Tris-HCl緩沖液，＜0.01%的硫柳汞防腐劑和添加劑，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
9）Enwash：1瓶，20ml，即用，含吐溫20的磷酸緩沖鹽， 2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定
10）            TMB底物液：1瓶，9ml液態(tài)底物液，即用，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。注意：底物液必須始終儲存于避光試劑瓶中。
11）            終止液：1瓶，內(nèi)含6ml即用型的終止液，1N的硫酸，2-8℃下儲存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。注意：強(qiáng)酸，請戴保護(hù)手套、口罩和安全鏡，按照安全條例處理所有的材料。
實驗所需器材但試劑盒不提供
1）可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀
2）生物學(xué)或高純度水
3）真空泵
4）洗板機(jī)
5）37℃無CO2的孵箱
6）1-10ul的單道移液器，50-200ul的單道和多道移液器。
7）聚丙烯試管
8）Parafilm封口膜
9）計時器
10）            旋渦混合器
樣品的采集與準(zhǔn)備
1）此實驗必須用血清來做。全血和血漿樣本不能直接檢測。
2）不要將不同批次的試劑混亂
3）不要加熱熱滅活的試驗血清
4）實驗前將所有試劑平衡至室溫，溫度的改變會對試驗有影響
5）避免反復(fù)凍融樣品血清
6）直接用干凈的槍頭從試劑瓶中移去試劑，不能轉(zhuǎn)移，避免污染
7）不用的板條應(yīng)立即放回至密封袋中保存
8）不要使用任何過期的試劑
9）避免試劑暴露受熱或陽光直射
10）            有些試劑可能會產(chǎn)生沉淀，使用前一定要混勻
11）            洗滌過程不完整會對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響
12）            為了減少由于孵育時間的差異而引起的漂移，建議底物液和終止液加入的時間和速度要*
13）            避免試劑中有微生物污染，尤其是酶聯(lián)物
14）            每一次吸取試劑，標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品時都應(yīng)用干凈的槍頭
實驗步驟
將所有的試劑成分和樣品都平衡至室溫。實驗前反復(fù)倒置以混合試劑和樣品。
試劑準(zhǔn)備：
1）1X洗滌液的配制：用生物學(xué)或高純度水將10倍濃縮型的洗滌液稀釋成1X的洗滌液。為了制備即用型的洗滌緩沖液，我們可以將120ml 10倍濃縮的洗滌液加入到1080ml蒸餾水或去離子水中，沖洗掉所有晶體，旋渦混合溶液以至所有晶體都溶解掉。制備好的洗滌液可在室溫下穩(wěn)定儲存6個月。使用前請檢查洗滌液是否被污染。
2）包被板的準(zhǔn)備：將實驗所需數(shù)目的板條置于板架上。將剩余的板條立即裝入包裝袋中，并儲存于2-8℃的環(huán)境下，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
操作步驟：
1）陽性質(zhì)控、陰性質(zhì)控都必須做雙份檢測,DENRA和NCA都要檢測，未知血清樣品可做一份或雙份，DENRA和NCA都要檢測，按照說明書上的操作流程圖進(jìn)行操作。
2）將實驗中使用的板條標(biāo)記好。
3）用試劑盒提供的樣品稀釋液將血清和質(zhì)控品稀釋100倍。用小聚丙烯試管進(jìn)行稀釋，稀釋時至少需要4ul血清、陽性質(zhì)控和陰性質(zhì)控。如：4ul血清加396ul稀釋液。
4）用單道或多道移液器將稀釋好的血清、陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控各50ul加入到相應(yīng)的微孔中。注意，所有的樣品都必須用DENRA和NCA檢測。
5）用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是沒有覆蓋的。
注意：這樣是為了保證溫度的分布在每個孔的底部和邊緣同等地散播。一旦頂部密封阻礙了蒸發(fā)，任何多余的封板膠必需被剪掉。
6）37℃下孵育1小時。注意：不要將微孔板疊放，必須單獨地分層平輔。這對于溫度的平等分布非常重要。不要使用CO2或任何氣體，不要讓板條接觸任何濕潤的物質(zhì)，如濕紙巾等。
7）溫育后，用洗板機(jī)洗板6次，每次每孔300ul。
8）在A-D列中加入50ul DENRA，在E-H列中加入50ul NCA。
9）用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是沒有覆蓋的。（同步驟5）
10）            37℃下孵育1小時。（同步驟6）
11）            溫育后，用洗板機(jī)洗板6次，每次每孔300ul。
12）            用多道移液器在每一微孔中加入50ul HRP標(biāo)記的酶聯(lián)物。
13）            用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是沒有覆蓋的。（同步驟5）
14）            37℃下孵育1小時。（同步驟6）
15）            溫育后，用洗板機(jī)洗板6次，每次每孔300ul。
16）            用多道移液器在每一微孔中加入150ul Enwash溶液。
17）            室溫下溫育（無需蓋板）5min。
18）            溫育后，用洗板機(jī)洗板6次，每次每孔300ul。
19）            用多道移液器在每一微孔中加入75ul TMB底物液。
20）            室溫避光溫育10min。
21）            溫育后，用多道移液器在每一微孔中加入50ul終止液，室溫溫育1min。
22）            溫育后，450nm處測    OD值。
質(zhì)量控制
每一試劑中均含有陰性和陽性質(zhì)控血清，這些質(zhì)控可接受的免疫指數(shù)（ISR）值會在以下的詳細(xì)表格中說明，陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控是用于監(jiān)測試劑的實質(zhì)性錯誤，陽性質(zhì)控并不保證試劑臨界值的精確性。如果任一質(zhì)控的ISR值不符合說明書，則本次實驗是無效的必須重做，如果實驗是無效的，病人的結(jié)果不能公布。質(zhì)量控制的執(zhí)行必須與地方的，國家的或聯(lián)盟規(guī)則要求和你實驗的質(zhì)量控制程序標(biāo)準(zhǔn)相*，建議使用者參照NCCLS C24A和42CFR493、1256作為質(zhì)量控制實踐的指引。以下的結(jié)果僅作為例子。
陰性質(zhì)控的計算：計算DENRA和NCA的登革熱病毒陰性質(zhì)控值。
例如：登革熱陰性質(zhì)控
                     DENRA         NCA
                       0.108          0.066
          No 2             0.082          0.061
          總和             0.190          0.127
平均值（DENRA）= 0.190÷2 = 0.095
       （NCA） = 0.127 ÷ 2 = 0.064
計算DENRA/NCA的比例： 0.095÷0.064 = 1.48
登革熱陰性質(zhì)控的計算DENRA/NCA比例高于1.65，則實驗必須重做。
陽性質(zhì)控的計算：計算NCA和DENRA的登革熱IgM陽性質(zhì)控。
例如：登革熱陽性質(zhì)控
DENVRA              NCA
                     0.635             0.105
         No 2            0.655             0.115
         總和            1.290             0.220
平均值（DENVRA）= 1.290÷2 = 0.645
       （NCA） = 0.220 ÷ 2 = 0.110
計算DENVRA/NCA的比例： 0.645÷0.110 = 5.86
登革熱陰性質(zhì)控的計算DENVRA/NCA比例低于5.0，則實驗必須重做。
為了能出具實驗報告，實驗結(jié)果必須滿足下列表格的要求。如果實驗結(jié)果不能*下列要求，則說明試劑退化了或者實驗步驟出現(xiàn)了問題，實驗必須重做。

說明：本公司為澳大利亞Panbio公司系列產(chǎn)品中國地區(qū)總代理。此本中文版說明書是由廣州健侖生物科技有限公司研究人員翻譯，過程中如有錯漏之處，請以廠家英文版說明書為準(zhǔn).謝謝！