肌氨酸鈉/N-甲基氨基乙酸鈉/N-甲基甘氨酸單鈉鹽/N-甲基甘氨酸鈉/sodium Sarcosin
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更新時(shí)間：2017-02-04 18:47:44瀏覽次數(shù)：442次
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用于DNA和RNA制備過程中蛋白酶的消化
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簡(jiǎn)介：
用于DNA和RNA制備過程中蛋白酶的消化
QIAGEN Protease和QIAGEN Proteinase K在寬范圍反應(yīng)條件下有廣泛的底物特異性和高活性。兩種蛋白酶在大部分DNA和RNA純化流程使用的緩沖液中都有高活性，經(jīng)QIAGEN*。
詳細(xì)信息：
性能
QIAGEN Protease和QIAGEN Proteinase K在大部分DNA和RNA純化流程使用的緩沖液以及寬范圍的鹽、變性劑、洗滌劑、pH和溫度條件下都有高活性（見表“常用緩沖液中的蛋白酶活性"）。兩種酶都經(jīng)QIAGEN*。
常用緩沖液中的蛋白酶活性*
緩沖液 | 活性(%) | |
QIAGEN | QIAGEN | |
30 mM Tris·Cl | 100 | 100 |
30 mM Tris·Cl; 30 mM EDTA; 5% Tween 20; 0.5% Triton X-100; 800 mM GuHCl? | 210 | 313 |
36 mM Tris·Cl; 36 mM EDTA; 5% Tween 20; 0.36% Triton X-100; 735 mM GuHCl? | 205 | 301 |
10 mM Tris·Cl; 25 mM EDTA; 100 mM NaCl; 0.5% SDS | 78 | 128 |
10 mM Tris·Cl; 100 mM EDTA; 20 mM NaCl; 1% Sarkosyl | 101 | 74 |
10 mM Tris·Cl; 50 mM KCl; 1.5 mM MgCl2; 0.45% Tween 20; 0.5% Triton X-100 | 159 | 106 |
10 mM Tris·Cl; 100 mM EDTA; 0.5% SDS | 98 | 120 |
30 mM Tris·Cl; 10 mM EDTA; 1% SDS | 38 | 203 |
* pH 8.0, 50°C, 1.25 µg/ml蛋白酶，孵育15 min。
? QIAGEN Genomic-tip操作流程中使用的Buffer G2，用于從血液、細(xì)胞培養(yǎng)基和組織中純化DNA。
? 用于細(xì)菌DNA純化的QIAGEN Genomic-tip實(shí)驗(yàn)方案中*的蛋白酶消化緩沖液條件（Buffers B1+ B2）。
原理
技術(shù)規(guī)格
| QIAGEN Proteinase K | |
規(guī)格 | 凍干粉 | 即用型溶液 |
量 | 7.5 AU或4 x 7.5 AU | 2 ml或10 ml (20 mg/ml) |
活性 | 45 mAU/mg蛋白 | >600 mAU/ml |
單位定義 | 一個(gè)mAU是指每分鐘1 mol*釋放的斐林陽(yáng)性的氨基酸和肽的活性 | |
QIAGEN Proteinase K是從腐生菌Tritirachium album中提取的一種枯草桿菌蛋白酶，非常適合短時(shí)間消化。其特異性活性高，在很大的溫度和pH 值范圍內(nèi)可保持穩(wěn)定，并在高溫時(shí)具有更高活性?？扇苄遭}在酶反應(yīng)中不是必須的。所以用于抑制核酸酶等Mg2+依賴性酶的EDTA將不會(huì)抑制Proteinase K的活性。以下QIAGEN試劑盒中包含有Proteinase K：
QIAamp DNA Mini Kit
QIAamp DNA Stool Mini Kit
QIAamp 96 DNA Swab BioRobot Kit
DNeasy Tissue Kit
DNeasy 96 Tissue Kit
QIAamp DNA Micro Kit
QIAamp MinElute Media Kit
QIAamp UltraSens Virus Kit
QIAamp Media MDx Kit
QIAGEN Protease是從重組Bacillus菌株中提取的一種*蛋白酶，可替代Proteinase K從多種樣本中提取DNA和RNA，且價(jià)格較低。QIAGEN Protease沒有DNase 和RNase活性。以下QIAGEN試劑盒中包含有QIAGEN Protease：
QIAamp DNA Blood Mini, Midi, and Maxi Kits
QIAamp 96 DNA Blood Kit
Blood & Cell Culture DNA Kits
QIAamp DNA Blood BioRobot 9604 Kit
QIAamp Virus BioRobot 9604 Kit
QIAamp DNA Blood BioRobot MDx Kit
QIAamp DSP 96 Virus MDx Kit
QIAamp DSP Virus Kit
QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit
注意：使用手動(dòng)QIAamp DNA Blood Kit和QIAGEN Blood & Cell Culture DNA Kit的用戶應(yīng)該用7 ml蒸餾水重懸每個(gè)瓶中的QIAGEN Protease。
注意：使用QIAamp DNA Blood BioRobot 9604 Kit的用戶應(yīng)該用10 ml蒸餾水重懸每個(gè)瓶中的QIAGEN Protease。
注意：QIAGEN蛋白酶不可與DNeasy Tissue、DNeasy 96 Tissue及QIAamp DNA Mini Kit中的ATL緩沖液同時(shí)使用。在SDS濃度大于0.5%、肌氨酰濃度大于1%、或有高濃度的其他去污劑時(shí)，EDTA的濃度必須小于8 mM，這樣才能在延長(zhǎng)的孵育時(shí)間內(nèi)達(dá)到*活性。
操作流程
QIAGEN Protease或QIAGEN Proteinase K的使用指南在相應(yīng)的試劑盒手冊(cè)中提供。
應(yīng)用
QIAGEN Protease和QIAGEN Proteinase K用于DNA和RNA制備過程中蛋白酶的消化。在設(shè)計(jì)蛋白酶消化時(shí)，應(yīng)考慮兩種酶之間的細(xì)微差異。
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