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BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒

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產(chǎn)品型號Invitrogen

品       牌

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更新時間:2023-11-06 20:08:46瀏覽次數(shù):153次

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產(chǎn)品簡介

BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒

詳細介紹

BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒兼具了傳統(tǒng) RNAi 載體的優(yōu)勢(穩(wěn)定表達和使用病毒遞送的能力)與組織特異性表達和同一轉(zhuǎn)錄本中多次靶標基因敲低能力。包括在 BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒中的 pcDNA™6.2-GW/miR 載體設計用于表達人工 miRNA,其經(jīng)基因工程改造后與靶序列具有 99% 同源性,將導致靶標切割。該載體包括來自內(nèi)源性 miRNA 的側(cè)翼和環(huán)序列,其指導從較長的 Pol II 轉(zhuǎn)錄本(miRNA 前體)中切除基因工程改造 miRNA。使用 Invitrogen 優(yōu)質(zhì) BLOCK-iT™ RNAi Designer,70% 以上的構建體產(chǎn)生超過 70% 的敲低?;蚬こ谈脑?miRNA 的 Pol II 表達可實現(xiàn):
o CMV 立即早期啟動子的強表達,可選擇通過 MultiSite Gateway™ 重組使用組織特異性或其他調(diào)節(jié)啟動子
o 與許多用于基因表達的 Invitrogen Gateway™ 目的 (DEST) 載體兼容;包括用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)導分裂、非分裂和原代細胞類型的慢病毒載體、用于單位點染色體整合的 Flp-In™ 系統(tǒng)以及替代報告基因融合構建體
o 在同一轉(zhuǎn)錄本上表達一個以上的基因工程改造 miRNA,允許同時敲低多個基因并產(chǎn)生合成表型
工作原理
對于 miR RNAi 序列的高水平表達,pcDNA™6.2-GW/miR 載體包括 CMV 啟動子(圖1)。只需在免費的在線 BLOCK-iT™ RNAi Designer 中輸入 RefSeq 登錄號或核苷酸序列,該軟件即可設計出與目標靶標具有 99% 同源性的優(yōu)化 miRNA。使用快速連接方案將 miRNA 克隆至載體中并進行轉(zhuǎn)染,以立即表達 miRNA。表達的 miRNA 在細胞核中通過內(nèi)源性細胞機制(包括 Drosha)加工,然后轉(zhuǎn)運至細胞質(zhì)中,在細胞質(zhì)中通過 Dicer 進行進一步加工(圖2)。然后將加工的 miRNA 摻入 RISC 中,在后者中其功能類似于 siRNA,并可導致 mRNA 靶標切割。
對于多種表達選項,miRNA 盒(miR 側(cè)翼區(qū)和與目標靶標同源的 miRNA)可輕松地轉(zhuǎn)移至多種 DEST 載體中。這通過 Gateway™ 重組反應發(fā)生,在該反應中,將 miRNA 盒轉(zhuǎn)移至 pDONR™ 載體中(BP 反應),然后轉(zhuǎn)移至 DEST 載體中(LR 反應)。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.


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