本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
人（Human）Ⅳ型肽精氨酸脫亞氨基酶（PAD4）ELISA檢測試劑盒使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)
先包被Ⅳ型肽精氨酸脫亞氨基酶（PAD4）抗體的包被微孔中，依次
加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用
底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作
用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Ⅳ型肽精氨酸脫亞
氨基酶（PAD4）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD
值），計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞
刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地
分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘
取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于
-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的
濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解
后再使用。洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min 內(nèi)，在450nm 波長處測定各孔的
OD 值。
結(jié)果判斷
繪制標準曲線：在Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應(yīng)
OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣
本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值，大于等于
0.9900。
2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0 U/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6 個月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所
產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔(dān)，本公司概不負責(zé)。
2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者
承擔(dān)。