本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
豬（Porcine）乙型腦炎病毒抗體（JEV-Ab）ELISA檢測試劑盒使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先
包被豬乙型腦炎病毒抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的
檢測抗原，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物
酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶
標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從
而判定標(biāo)本中豬乙型腦炎病毒抗體（JEV-Ab）的存在與否。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞
刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地
分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘
取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于
-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項(xiàng)
1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的
濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解
后再使用。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。3. 預(yù)處理后的樣本請按照操作步驟用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋以達(dá)到
試劑盒的的*檢測效果。
4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱 96孔配置 48孔配置 備注
微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無
陰性對照0.5mL 0.5mL 無
陽性對照0.5mL 0.5mL 無
檢測抗原-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進(jìn)行稀釋
樣本稀釋液6mL 3mL 無
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液6mL 3mL 無
封板膜2 張2 張無
說明書1 份1 份無
自封袋1 個(gè)1 個(gè)無
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋，即1 份的20×洗滌緩
沖液加19 份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min 后甩盡
孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5 次。
2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封
袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、
陽性對照各50μL；
3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；
4. 隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）
標(biāo)記的檢測抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫
箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去
洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。6. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min 內(nèi)，在450nm 波長處測定各孔的
OD 值。
結(jié)果判斷
1. 試驗(yàn)有效性：陽性對照孔OD 值平均值≥1.00；
陰性對照孔OD 值平均值≤0.15。
2. 臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
3. 陰性判斷：樣品OD 值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性
4. 陽性判斷：樣品OD 值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性
試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性：陽性對照孔OD 值平均值≥1.00；陰性對照孔OD 值平均
值≤0.15，說明試驗(yàn)結(jié)果有效。
2. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
4. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
5. 有效期：6 個(gè)月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所
產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者
承擔(dān)。