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上海繼錦化學(xué)科技有限公司
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豬乙型腦炎病毒抗體(IgG)ELISA診斷試劑盒說(shuō)明書(shū)

時(shí)間:2012/3/9閱讀:1076
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產(chǎn)品名稱(chēng)
通用名稱(chēng):豬乙型腦炎病毒抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名稱(chēng):Porcine Japanese B Encephalitis Virus Antibody Test Kit (ELISA), JEV Ab
包裝規(guī)格
96×2測(cè)試/
預(yù)期用途
本試劑盒用于定性測(cè)定豬血清中日本乙型腦炎病毒(又稱(chēng)流行性乙型腦炎)IgG抗體。用于評(píng)估豬場(chǎng)豬乙型腦炎病毒疫苗免疫狀況,感染豬的血清學(xué)診斷以及豬乙型腦炎病毒病的流行病學(xué)調(diào)查。
檢驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)原理,由包被有高純度的豬乙型腦炎抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的JEV-IgG結(jié)合,再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+JEV-IgG+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物,加入顯色劑,通過(guò)酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與JEV-IgG的量成正比,當(dāng)顯色超過(guò)設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽(yáng)性,表明免疫有效或有自然感染。
主要組成成份

1
JEV抗原包被板
96T×2
包被有JEV抗原
2
酶標(biāo)記物(黃蓋)
22ml×1
含辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG抗體
3
樣本稀釋液(透明蓋)
50ml×1
主要成份為0.01M PBS緩沖液
4
濃縮洗滌液(20×)(白蓋)
50ml×1
PBST緩沖液,用前用去離子水20倍稀釋
5
JEV-IgG陰性對(duì)照血清(綠蓋)
1.5ml×1
主要成份為JEV-IgG陰性血清
6
JEV-IgG陽(yáng)性對(duì)照血清(紅蓋)
1.5ml×1
主要成份為JEV-IgG陽(yáng)性血清
7
顯色劑A(紫蓋)
12ml×1
主要成份為過(guò)氧化脲
8
顯色劑B(黃蓋)
12ml×1
主要成份為TMB
9
終止液(藍(lán)蓋)
12ml×1
主要成份為HF
10
蓋板膜
6
 
11
說(shuō)明書(shū)
1
 

不同批號(hào)的試劑組份不可混用。
儲(chǔ)存條件及有效期
2℃~8避光保存,防止冷凍,有效期6個(gè)月。
適用儀器
1.酶標(biāo)儀,單波長(zhǎng)630nm測(cè)量。
2ELISA用洗板機(jī)。
3.微量移液器。
4.水浴箱或恒溫箱。
5.微量振蕩器。
樣本要求
1.本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清,樣本應(yīng)無(wú)菌采集,28貯存不超過(guò)一周,長(zhǎng)期應(yīng)在-20以下保存。
2.避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長(zhǎng)菌的樣本。
3.樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實(shí)驗(yàn)。
檢驗(yàn)方法
1.加樣:根據(jù)樣本數(shù)量,取所需板條。設(shè)空白對(duì)照1(不加任何液體);設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各2孔,分別加入不稀釋的陰、陽(yáng)性對(duì)照血清100ul于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔,用樣品稀釋液將待檢樣品40稀釋后混勻(如將6μL樣本加到234μL樣品稀釋液中),每孔加入稀釋好的樣本100μL。
2.溫育:加好樣后振蕩10秒,充分混勻,置37溫育30分鐘。
3.洗板:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液(濃縮洗滌液用去離子水以20倍稀釋?zhuān)┳M反應(yīng)板孔,洗滌3次,每次停留3分鐘,zui后一次洗后拍干。
4.加酶:每孔加酶標(biāo)記物100ul,注意:空白孔不加酶標(biāo)記物,也不加其他任何液體。
5.溫育:置37溫育30分鐘。
6.洗板:同上洗滌。
7.顯色:每孔加顯色劑A、B50ul,振蕩混勻,室溫(25)避光反應(yīng)10分鐘。
8.終止:每孔加終止液50ul,振蕩10秒,充分混勻。終止后10分鐘內(nèi)讀數(shù)。
9.讀數(shù):用酶標(biāo)儀單波長(zhǎng)630nm以空白孔調(diào)零,讀取各孔吸光度值(A值)。注意:若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒(méi)有以空白孔調(diào)零,則所得的結(jié)果均應(yīng)減去空白孔A值再做判定。
10.結(jié)果判定:
樣品A值大于0.4,判為JEV-IgG陽(yáng)性;樣品A值在0.20.4之間,判為JEV-IgG可疑;樣品A值小于0.2,判為JEV-IgG陰性。
陰性對(duì)照血清A值應(yīng)小于0.20,陽(yáng)性對(duì)照血清A值應(yīng)大于或等于0.40,否則試驗(yàn)不成立,需重新試驗(yàn)。
注意:若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒(méi)有以空白孔調(diào)零,則上述所有測(cè)得的結(jié)果均應(yīng)減去空白孔A值再做判定。
參考值(參考范圍)
未感染也未免疫豬乙型腦炎疫苗的健康豬群為陰性,A值小于0.2。仔豬因其體內(nèi)含有有母源抗體,其測(cè)定A值可能大于臨界值。
檢驗(yàn)結(jié)果的解釋
1.嚴(yán)重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球、有沉淀物、長(zhǎng)菌的樣本可能導(dǎo)致假陽(yáng)性。
2.因個(gè)體差異或免疫時(shí)間長(zhǎng)短等因素可能會(huì)出現(xiàn)個(gè)別豬只免疫疫苗后檢測(cè)結(jié)果為陰性。
3.陽(yáng)性結(jié)果用于感染豬的血清學(xué)診斷以及流行病學(xué)調(diào)查時(shí)需結(jié)合其他方法和臨床資料進(jìn)行。
產(chǎn)品性能指標(biāo)
1.特異性    以本品檢測(cè)30份陰性參比血清不出假陽(yáng)性。
2.敏感性    以本品檢測(cè)30份陽(yáng)性參比血清不出現(xiàn)陰性。
3.精密性    用精密性參比品測(cè)定,CV%)不高于15%n=10)。
4.穩(wěn)定性    試劑盒在28放置6個(gè)月或37放置3天,檢定結(jié)果達(dá)到以上1-3標(biāo)準(zhǔn)。
注意事項(xiàng)
1.本試劑盒僅用于體外診斷。
2.本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對(duì)待,操作時(shí)需戴手套穿工作衣。
3.實(shí)驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
4.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開(kāi),未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封4保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋,與其它配套組份放入試劑盒中于2-8避光保存。
5.若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶,屬正?,F(xiàn)象,放置37至溶解后即可。
6.應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。
7.加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢,防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
8.終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。
 
 

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