【用途】
豬藍(lán)耳病ELISA診斷試劑盒用于檢測(cè)豬血清中豬藍(lán)耳病病毒抗體。評(píng)估豬場(chǎng)豬藍(lán)耳病疫苗免疫狀況。豬藍(lán)耳病的流行病學(xué)調(diào)查。
【簡(jiǎn)介】
豬藍(lán)耳病對(duì)豬影響的特征是引起豬嚴(yán)重的流產(chǎn)（早產(chǎn)，流產(chǎn)，弱胎，死胎）和呼吸道癥狀，引起流產(chǎn)是豬藍(lán)耳病的一個(gè)特征，而呼吸道癥狀也很?chē)?yán)重，特別在育成豬上，它嚴(yán)重的影響了豬的生長(zhǎng)（高投入低產(chǎn)出），造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
世界上許多地區(qū)還沒(méi)有地測(cè)定此病的感染率，許多國(guó)家估計(jì)高達(dá)80%。
此病的主要癥狀是繁殖障礙，引起早產(chǎn)、后期流產(chǎn)、弱仔、死產(chǎn)、胎兒木乃伊化、產(chǎn)仔率下降和發(fā)情期延遲等。這些癥狀可持續(xù)一到三個(gè)月。呼吸癥狀是此病的另一個(gè)顯著特征，大多數(shù)發(fā)生于低于3-4周齡的仔豬，但也可發(fā)生于生產(chǎn)周期的大多數(shù)階段。
血清學(xué)診斷技術(shù)是一項(xiàng)快速、特異的技術(shù)，可以直接檢測(cè)豬藍(lán)耳病病毒的抗體。
試劑盒由抗原包被的微孔板，酶標(biāo)羊抗豬IgG及其它試劑制成，應(yīng)用間接ELISA原理檢測(cè)豬血清中抗豬藍(lán)耳病病毒的抗體。
【原理】
本試劑盒是采用滅活過(guò)的豬藍(lán)耳病病毒抗原包被微孔板，在試驗(yàn)中，按操作步驟加入對(duì)照血清和待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有豬藍(lán)耳病特異性抗體，則將與微孔板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗，與微孔板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入HF溶液中止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀630nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的OD值。
【試劑盒主要成分】
1、 包被抗原的微孔板 2塊 （96孔）
2、 陰（綠蓋）、陽(yáng)（紅蓋）性對(duì)照血清 各1管 （1ml/管）
3、 抗豬IgG-HRP結(jié)合物 （黃蓋） 1瓶 （22ml/瓶）
4、 20倍濃縮洗滌液（白蓋） 1瓶 （30ml/瓶）
5、 底物A（紫蓋）液、B液（黃蓋） 1瓶 （12ml/瓶）
6、 終止液（藍(lán)蓋） 1瓶 （12ml/瓶）
7、 樣品稀釋液 （透明蓋） 1瓶 （50ml/瓶）
【用前準(zhǔn)備】
仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，所有試劑在4℃條件下保存，禁止結(jié)冰，如果干燥袋發(fā)紅不能使用，不用的孔必須密封好以防潮濕對(duì)平板有害，不要使平板接觸強(qiáng)光和氧化物。不要使用過(guò)期的成分或混合使用成分。注意加樣和沖洗，以確保試驗(yàn)的度和準(zhǔn)確度。操作過(guò)程中注意安全，要使用手套，終止液含有氫氟酸使用要小心。所有的廢液要經(jīng)過(guò)處理和凈化。
本品為獸用產(chǎn)品。
【未提供的需用材料】
微量加樣器、加液槽、蒸餾水、恒溫箱、酶標(biāo)儀、吸水紙
【注意事項(xiàng)】
1、 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫。
2、 不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用。
3、 注意防止試劑盒各組分受污染。
4、 微孔板拆封后避免受潮或沾水（每次將剩余的微孔板用封口袋扎緊后盡快置于4℃）。
【試劑配制】
洗滌液：用蒸餾水稀釋20倍濃縮洗滌液，混勻。
【操作步驟】
1、 取預(yù)包被的微孔板（根據(jù)樣品多少，可拆開(kāi)分次使用），用樣品稀釋液將待檢樣品40倍稀釋后加入板孔中，每孔加100μl。陰、陽(yáng)性對(duì)照各設(shè)2孔，每孔100μl。另設(shè)一空白對(duì)照孔，空白對(duì)照孔加100μl稀釋液。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃溫育30min。
2、 甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗板3次，300μl/孔，每次靜置3分鐘倒掉，zui后一次在不掉屑干凈吸水紙上拍干。
3、 每孔加酶標(biāo)二抗（抗豬IgG-HRP結(jié)合物）100μl，置37℃溫育30min。
4、 洗滌3次, 方法同2。
5、 每孔加底物A液、B液各1滴（50μl），混勻，室溫（20-25℃）避光顯色10min。
6、 每孔加終止液1滴（50μl），10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。
【結(jié)果判定】
以空白孔調(diào)零，在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔OD630值。試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD630值大于或等于0.4，陰性對(duì)照孔平均OD630值必須小于0.2。
樣品OD630值大于0.4，判為陽(yáng)性；樣品OD630值在0.2到0.4之間，判為可疑；樣品OD630值小于0.2，判為陰性。
【規(guī) 格】 96孔×2塊
【有 效 期】 6個(gè)月
【貯 存】 2-8℃避光保存
【生產(chǎn)日期】 見(jiàn)試劑盒外包裝
提示：酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣，酶標(biāo)板仍然正常有效，不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)放心使用。
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