【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：豬偽狂犬病毒gE 抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：Swine Pseudorabies Virus gE Antibody Test Kit （ELISA）, gE Ab
【包裝規(guī)格】
96×2 測(cè)試/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒用于定性測(cè)定豬血清中偽狂犬病毒gE 蛋白的IgG 抗體。用于區(qū)別臨床野毒感染產(chǎn)生的抗體和
用gE 基因缺失疫苗免疫產(chǎn)生的抗體、感染豬的血清學(xué)診斷以及豬偽狂犬病毒病的流行病學(xué)調(diào)查。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理，由包被有高純度的gE 蛋白的微孔反應(yīng)板、辣根
過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG 及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的gE-IgG 結(jié)合，再與酶
標(biāo)抗豬IgG 抗體形成“包被抗原+gE-IgG+酶標(biāo)抗豬IgG 抗體”復(fù)合物，加入顯色劑，通過(guò)酶催化反應(yīng)顯色。
顯色深淺與gE-IgG 的量成正比，當(dāng)顯色超過(guò)設(shè)定的臨介值時(shí)結(jié)果判為陽(yáng)性，表明豬有自然感染。
【主要組成成份】
1． gE 抗原包被板96T×2 塊包被有g(shù)E 蛋白抗原
2． 酶標(biāo)記物（黃蓋） 22ml×1 瓶含辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG 抗體
3． 樣本稀釋液（透明蓋） 25ml×1 瓶主要成份為0.01M PBS 緩沖液
4． 濃縮洗滌液（20×）（白蓋） 50ml×1 瓶PBST 緩沖液，用前用去離子水20 倍稀釋
5． gE-IgG 陰性對(duì)照血清（綠蓋） 1.5ml×1 瓶主要成份為gE-IgG 陰性血清
6． gE-IgG 陽(yáng)性對(duì)照血清（紅蓋） 1.5ml×1 瓶主要成份為gE-IgG 陽(yáng)性血清
7． 顯色劑A（紫蓋） 12ml×1 瓶主要成份為過(guò)氧化脲
8． 顯色劑B（黃蓋） 12ml×1 瓶主要成份為TMB
9． 終止液（藍(lán)蓋） 12ml×1 瓶主要成份為H2SO4
10． 蓋板膜6 張
11． 說(shuō)明書1 份
不同批號(hào)的試劑組份不可混用。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期6 個(gè)月。
【適用儀器】
1．酶標(biāo)儀，單波長(zhǎng)450nm 測(cè)量或雙波長(zhǎng)450/630nm 測(cè)量。
2．ELISA 用洗板機(jī)。
3．微量移液器。
4．水浴箱或恒溫箱。
5．微量振蕩器。
【樣本要求】
1．本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無(wú)菌采集，2℃～8℃貯存不超過(guò)一周，長(zhǎng)期應(yīng)在-20℃以下保存。
2．避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長(zhǎng)菌的樣本。
3．樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實(shí)驗(yàn)。
【檢驗(yàn)方法】
1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條。單波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，需設(shè)空白對(duì)照1 孔（不加任何液體）；雙波長(zhǎng)檢測(cè)
時(shí)，不設(shè)空白對(duì)照孔。設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各2 孔，分別加入不稀釋的陰、陽(yáng)性對(duì)照血清100μl 于相
應(yīng)孔中。其余為樣本孔，每孔加100μl 樣本稀釋液，再分別加入樣本10μl（加入樣本后顏色會(huì)有
變化）。
2．溫育：加好樣后振蕩10 秒，充分混勻，置37℃溫育30 分鐘。
3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液（濃縮洗滌液用去離子水以20 倍稀釋）注滿反應(yīng)板孔，洗滌5 次，每
次停留1 分鐘，zui后一次洗后拍干。
4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100μl，注意：空白孔不加酶標(biāo)記物，也不加其他任何液體。
5．溫育：置37℃溫育30 分鐘。
6．洗板：同上洗滌。
7．顯色：每孔加顯色劑A、B 各50μl，振蕩混勻，37℃避光反應(yīng)15分鐘。
8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10 秒，充分混勻。終止后5～30 分鐘內(nèi)讀數(shù)。
9．讀數(shù)：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，酶標(biāo)儀檢測(cè)波長(zhǎng)為450nm，以空白孔調(diào)零，讀取各孔吸光度值（A 值）；雙波長(zhǎng)
檢測(cè)時(shí)，以450nm 為主波長(zhǎng)、630nm 為參比波長(zhǎng)，讀取各孔吸光度值（A 值）。注意：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)檢
測(cè)時(shí)，若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒(méi)有以空白孔調(diào)零，則所得的結(jié)果均應(yīng)減去空白孔A 值再做計(jì)算和判定。
10．結(jié)果判定：
臨界值（CO.）= 0.15。
樣本A 值（S）/臨界值（CO.）≥1，判定為gE-IgG 陽(yáng)性； S/CO.＜1，判定為gE-IgG 陰性。
陰性對(duì)照血清A 值應(yīng)小于0.10，陽(yáng)性對(duì)照血清A 值應(yīng)大于0.70，否則試驗(yàn)不成立，需重新試驗(yàn)。注意：
單波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，若酶標(biāo)儀讀數(shù)前沒(méi)有以空白孔調(diào)零，則陰陽(yáng)性對(duì)照血清A 值均應(yīng)減去空白孔A 值再做判定。
【參考值（參考范圍）】
未自然感染豬偽狂犬病毒的健康豬群為陰性，S/CO.＜1。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1．嚴(yán)重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球、有沉淀物、長(zhǎng)菌的樣本可能導(dǎo)致假陽(yáng)性。
2．陽(yáng)性結(jié)果用于感染豬的血清學(xué)診斷以及流行病學(xué)調(diào)查時(shí)需結(jié)合其他方法和臨床資料進(jìn)行。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1．特異性以本品檢測(cè)30 份陰性參比血清不出假陽(yáng)性。
2．敏感性以本品檢測(cè)30 份陽(yáng)性參比血清不出現(xiàn)陰性。
3．精密性用精密性參比品測(cè)定，CV（%）不高于15%（n=10）。
4．穩(wěn)定性試劑盒在2℃～8℃放置6 個(gè)月或37℃放置3 天，檢定結(jié)果達(dá)到以上1-3 標(biāo)準(zhǔn)。
【注意事項(xiàng)】
1．本試劑盒僅用于體外診斷。
2．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對(duì)待，操作時(shí)需戴手套穿工作衣。
3．實(shí)驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30 分鐘，或用5.0g/L 次氯酸鈉等消毒劑處理30 分鐘后廢棄。
4．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開(kāi)，未用完的微孔板須放回有干燥劑的
鋁箔袋并密封4℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光
保存。
5．若20 倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正?，F(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可。
6．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。
7．加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
8．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。
【產(chǎn)品版本】gE V.1102