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250次細胞培養(yǎng)的生長過程:
潛伏期→指數(shù)增生期→停滯期
潛伏期(latent phase)
細胞接種后,先經(jīng)過一個在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)的懸浮期.此時,細胞質(zhì)回縮, 胞體呈圓球形.然后細胞貼附于載體表面,稱貼壁,懸浮期結(jié)束. 細胞貼壁速度與細胞種類, 培養(yǎng)基成分,載體的理化性質(zhì)等密切相關(guān)。一般情況下,原代培養(yǎng)細胞貼壁速度慢,可達10-24 小時或更多, 而傳代細胞系貼壁速度快, 通常10-30 分鐘即可貼壁。細胞貼壁后還需經(jīng)過一個潛伏階段,才進入生長和增殖期.原代培養(yǎng)細胞潛伏期長,約24-96 小時或更長, 連續(xù)細胞系和腫瘤細胞潛伏期短,僅需6-24 小時。
指數(shù)增生期(logarithmic growth phase)
這是細胞增殖zui旺盛的階段,分裂相細胞增多。指數(shù)增生期細胞分裂相數(shù)量可作為判定細胞生長是否旺盛的一個重要標志。通常以細胞分裂相指數(shù)(Mitotic index, MI)表示,即細胞群中每1000 個細胞中的分裂相數(shù)。一般細胞的分裂指數(shù)介于0.1%-0.5%,原代細胞分裂指數(shù)較低,而連續(xù)細胞和腫瘤細胞分裂相指數(shù)可高達3%-5%。指數(shù)增生期的細胞活力時期,是進行各種實驗*時期,也是凍存細胞的時機。在接種細胞數(shù)量適宜情況下,指數(shù)增生期持續(xù)3-5 天后,隨著細胞數(shù)量不斷增多、生長空間減少,zui后細胞相互接觸匯合成片。正常細胞相互接觸后能抑制細胞運動,這種現(xiàn)象稱接觸抑制現(xiàn)象(contact inhibition)。而惡性腫瘤細胞無接觸抑制現(xiàn)象,能繼續(xù)移動和增殖,導(dǎo)致細胞向三維空間擴展,使細胞發(fā)生堆積(piled up)。細胞接觸匯合成片后,雖然發(fā)生接觸抑制,但只要營養(yǎng)充分,細胞仍能進行增殖分裂,因此細胞數(shù)仍然在增多。但是,當細胞密度進一步增大,培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分減少,代謝產(chǎn)物增多時,細胞因營養(yǎng)枯竭和代
謝產(chǎn)物的影響,導(dǎo)致細胞分裂停止,這種現(xiàn)象稱密度抑制現(xiàn)象(Density Inhibition)。
停滯期(Stagnate phase)
細胞數(shù)量達到飽和密度后,如不及時進行傳代,細胞就會停止增殖,進入停止期。此時細胞數(shù)持平,故也稱平臺期(Plateau phase)。停滯期細胞雖不增殖,但仍有代謝活動。如不進行分離傳代,細胞會因培養(yǎng)液中營養(yǎng)耗盡、代謝產(chǎn)物積聚、pH 下降等因素中毒,出現(xiàn)形態(tài)改變,貼壁細胞會脫落,嚴重的會發(fā)生死亡,因此,應(yīng)及時傳代。
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