在做ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，難免會(huì)遇到各種不同的問(wèn)題，比如標(biāo)準(zhǔn)曲線不好，試劑盒的回收率，假陰性，假陽(yáng)性，實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性不好等等。

ELISA試劑盒曲線問(wèn)題：

 1.OD值不正常試劑盒未回溫，試劑盒回溫到25℃溫度控制不好，控制正確溫度孵育時(shí)間不準(zhǔn)確，控制孵育時(shí)間洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、洗滌次數(shù)增 加，洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干陽(yáng)光直射，對(duì)著風(fēng)直接吹，避風(fēng)避酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)錯(cuò)誤，酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)450nm抗體的稀釋錯(cuò)誤，正確的稀釋抗體水質(zhì)問(wèn)題，用娃哈哈礦泉水代替

2.白   板

洗滌液配制錯(cuò)誤，正確的配制洗滌液少加液體（錯(cuò)加液體），正確的步驟加液體

3.無(wú) 梯 度

標(biāo)準(zhǔn)品也污染，換標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)板OD值不正常，控制溫度時(shí)間在做一次人為點(diǎn)板，不要點(diǎn)板

4.線 性 不 好

OD值不正常，控制溫度時(shí)間在做一次ELISA試劑盒回收率

1.空白管陽(yáng)性高

樣本本身就是陽(yáng)性樣本，換陰性樣本做回收率空白管在實(shí)驗(yàn)中被污染，實(shí)驗(yàn)中防止交叉污染

水質(zhì)原因用，娃哈哈礦泉水代替

2.偏  高

添加量不準(zhǔn)確，的添加量添加濃度不適合，添加合適的濃度取液吹干量多，準(zhǔn)確的取液吹干取到其它相層液體，取需用相吹干復(fù)溶液未稀釋或加入量少，正確的稀釋復(fù)溶液

3.偏  低

添加量不準(zhǔn)確，的添加量添加濃度不適合，添加合適的濃度取液吹干量少，準(zhǔn)確的取液吹干復(fù)溶液稀釋錯(cuò)誤或加入量多，正確的稀釋復(fù)溶液

假陰、陽(yáng)性

1，水質(zhì)原因：點(diǎn)復(fù)溶液驗(yàn)證，用娃哈哈礦泉水代替

2，實(shí)驗(yàn)操作原因吸取到其它相吹干，準(zhǔn)確的取液吹干離心不*，延長(zhǎng)離心時(shí)間

樣本的污染，更換樣本乳化未處理*，溫?。?/span>70℃）處理乳化現(xiàn)象

3，儀器試劑原因

離心管未清洗干凈，ELISA試劑盒正確的洗滌器具有機(jī)溶劑的影響，做試劑空白看影響結(jié)果

4，衍生化試劑原因（長(zhǎng)時(shí)間衍生化試劑變質(zhì)）,更換衍生化試劑

5，與曲線好壞相關(guān),，保證曲線的正常