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以下是我公司研究人為您整理地關(guān)于蛋白胨細(xì)胞的冷凍保存方法:
(1)傳統(tǒng)方法: 冷存管置于4℃10分鐘--->-20℃30分鐘--->-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)--->液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí),以防止胞內(nèi)冰晶過(guò)大,造成蛋白胨細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
(2)程序降溫:利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。
步驟:
(1)冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基,使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期。
(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基、血清,逐滴加入二甲基亞砜(DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。
(3)離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。
(4)取與蛋白胨細(xì)胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液,并晃動(dòng)試管,制成細(xì)胞凍存懸液(DMSOzui后濃度為5~10%),使細(xì)胞濃度為1~5×106cells/ml,混合均勻,分裝
于已標(biāo)示*之冷凍保存管中,1~2mlial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè)。嚴(yán)密封口后,注明細(xì)胞名稱(chēng)、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。
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