試劑盒名稱：人抗表皮細(xì)胞基底膜抗體(EBMZ)ELISA試劑盒

規(guī)      格：48T/96T

產(chǎn)品的用途：僅供科研ELISA檢測試劑盒

檢測的原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。

標(biāo)本的處理：

（1）細(xì)胞培養(yǎng)上清液

根據(jù)需要用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液稀釋樣品，然后按照說明書所述方法檢測。*稀釋濃度是稀釋5倍。

（2）腦脊液

根據(jù)需要用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液稀釋樣品，然后按照說明書所述方法檢測。*稀釋濃度是5倍。

（3）血漿

①用EDTA2K離心收集在真空血液收集管中的血液，5,000×g，15分鐘，4℃，分離血漿樣品，然后儲存在零下80℃直到使用。

②用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液5倍稀釋血漿以避免血漿中的干擾物質(zhì)影響檢測，按照說明書方法檢測。

人抗表皮細(xì)胞基底膜抗體(EBMZ)ELISA試劑盒顯色的重要性

顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng)，此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi)，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進(jìn)行。在定量測定中，加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。定性測定的顯色可在室溫進(jìn)行，時間一般不需要嚴(yán)格控制，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長反應(yīng)時間，及時判斷。

OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深，再延長反應(yīng)時間，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行，顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng)。OPD產(chǎn)物用酸終止后，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。

TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當(dāng)時間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達(dá)，隨即逐漸減弱，至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和SDS等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長時間(12-24小時)不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色，此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。

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