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上海金穗生物科技有限公司

噬菌體展示文庫(kù)的再增殖

時(shí)間:2012-12-14閱讀:327
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1,用一系列稀釋液感染大腸桿菌XLl-Blue(OD600=0.5~1.0),并涂布在用于噬菌粒篩 選的適當(dāng)培養(yǎng)基上,以測(cè)定噬菌體文庫(kù)儲(chǔ)液的感染性滴度(infectivity titre)。這個(gè)滴 度取決于噬菌體儲(chǔ)液的保存代數(shù)和狀態(tài),可能少于或者等于由測(cè)定OD280得到的噬菌體濃度。

2.接種大量來(lái)自新鮮LB/tet板[時(shí)間少于兩周;接種體(inoculum)應(yīng)該不是單克隆 的]的大腸桿菌XLl-Blue于含有100m1 2 YT/tet培養(yǎng)基的500m1帶塞錐形瓶中。37℃200r/min培養(yǎng)至OD600=1.0(5×108cfu/m1,總計(jì)5×10lO cfu)。加入5×10l0個(gè)感染性噬菌粒,并于37℃200r/min培養(yǎng)20分鐘。取出少量菌液在選擇性培養(yǎng)基上進(jìn)行滴定,以測(cè)定感染的效率。轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基到含有1 L 2YT培養(yǎng)基的4 L帶塞錐形瓶中,其中含有適用于噬菌粒篩選的抗生素(例如2YT/carb培養(yǎng)基)和M13K07輔助噬菌體(每毫升1010個(gè)噬菌體)。37℃200r/min培養(yǎng)過(guò)夜。

3.沉淀和純化噬菌粒。立即使用得到的噬菌體。

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