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上海金穗生物科技有限公司

構(gòu)建pⅧ噬菌粒庫:擴增與儲存

時間:2012-12-17閱讀:377
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A.輔助噬菌體感染和pⅧ誘導產(chǎn)生
1.按10:1感染重數(shù)加入VSC-M13輔助噬菌體[約1012空斑形成單位(pfu)]到100ml 已轉(zhuǎn)化的細菌中(見實驗方案6.3)。于37℃靜置孵育30分鐘。
2.將上述培養(yǎng)物加入到一個含有500mlSOPamp/glu培養(yǎng)基的三角瓶中。加入0.6 m1*溶液和6ml 20%阿拉伯糖溶液。于37℃振搖培養(yǎng)過夜。
B.收集擴增后的噬菌粒庫
1.于4℃ 12000g轉(zhuǎn)速(對于JA-10轉(zhuǎn)子為8000r/min)將上述過夜培養(yǎng)物離心。將上清 轉(zhuǎn)移到一個新的離心管中,并再次離心。
2.將上清轉(zhuǎn)移到另一個新的離心管中,加入0.2倍體積的PEG/NaCl以沉降噬菌體。充分混合后冰上靜置1小時。
3.于8000r/min離心15分鐘將噬菌體沉降。小心將上清除去,用10ml PBS將噬菌體沉淀重懸。滴定噬菌體儲液;滴定結(jié)果出來前,噬菌體懸液可在4℃短期保存24小時。若需要長期保存,可將噬菌體懸液以1000倍庫當量,于-20℃分批凍存。

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