1．為了洗脫細(xì)菌，將900ul的K91 Kan Terrific肉湯菌液加入裂解后的細(xì)胞，并于室溫下孵育20分鐘。

2．將步驟1所得全部倒入含有9m1四環(huán)素濃度為0．2ug/ml的NZY培養(yǎng)基的50m1錐形瓶中。室溫下孵育30分鐘。

3．為了測(cè)定fd噬菌體的產(chǎn)出量，將步驟2所得分別取1ul、10ul及100ul，涂布到四環(huán)素濃度為40ug/ml的LB瓊脂平板中，每種涂布3個(gè)?？梢圆捎貌ＡЩ蚪饘俟巫樱驘o(wú)菌玻璃珠，來(lái)涂布細(xì)菌。將平板置于37℃孵育16小時(shí)（過(guò)夜）。

4．為了測(cè)定每份器官或組織的噬菌體總產(chǎn)出量，將每個(gè)平板上的克?。═U）數(shù)目除以涂板的體積（1ul、10ul或100ul），然后再乘以10000ul。這樣計(jì)算的原因是：步驟2中稀釋了10倍，而加到沉淀中的是1000ul K91Kan菌液。例如：在腦組織的10ul培養(yǎng)基平板中平均有200TU的噬菌體，那么在每克腦組織中噬菌體總產(chǎn)出量為2．0×105TU。對(duì)每份器官和組織中三個(gè)平板的計(jì)數(shù)取平均值，并對(duì)數(shù)據(jù)作圖。

5．為了擴(kuò)增及純化回收的“噬菌體， 當(dāng)把樣品涂布在平板上以后，在2L的錐形瓶中將步驟2所剩的9．67ml樣品加到含40ug/ml四環(huán)素的200ml的NZY培養(yǎng)基中，于37℃搖瓶培養(yǎng)16小時(shí)（過(guò)夜）。

6．把過(guò)夜培養(yǎng)的菌液倒入300m1的離心管中，在Sorvall@SLA—3000轉(zhuǎn)子中以8000r/min離心15分鐘。通過(guò)帶0．2um濾膜的真空抽濾瓶將上清過(guò)濾到500ml無(wú)菌瓶中。

7，通過(guò)向每200ml噬菌體中添加40ml的PEG/NaCl溶液，把上清中的噬菌體沉淀下來(lái)，并于4℃孵育4～16小時(shí)。