[方法]
　　
　　1．配制50ulPCR反應(yīng)混合液，包含：
　　
　　●水，34．5ul
　　
　　●20XdNTP（每種5mmol／L），2，5ul
　　
　　●10XVent聚合酶緩沖液，5．0ul
　　
　　●LMB3引物（10pmol/u1），2．5ul
　　
　　●scF討HXhoFOR引物（10pmol/ul），2．5ul
　　
　　●scFv模板DNA（100ng），2．0u1
　　
　　●VentDNA聚合酶（2單位），1．0u1
　　
　　2．在有加熱蓋的熱循環(huán)儀內(nèi)加熱反應(yīng)混合液到94℃，5分鐘。
　　
　　3．以94℃30秒、42℃30秒、72℃1分鐘的條件共循環(huán)25次，擴(kuò)增VH基因。
　　
　　4．用WizardPCR純化試劑盒芝之PCR產(chǎn)物。
　　
　　5．用XhoI和NcoI消化PCR產(chǎn)物；但除了用XhoI替代NcoI，還需在NEB2緩沖液中進(jìn)行消化。
　　
　　6．制備VL基因文庫載體；但需用XhoI和NcoI消化載體.
　　
　　7．連接已消化的PCR產(chǎn)物和已消化的載體，并電轉(zhuǎn)化到大腸桿菌TG1中,構(gòu)建輕鏈改組文庫。