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方法步驟:
1) 前一天進(jìn)行轉(zhuǎn)形的培養(yǎng)皿,當(dāng)菌落長(zhǎng)至約0.5 mm 大小時(shí),將培養(yǎng)皿移至4℃放置至少1 h。
2) 準(zhǔn)備一張無菌的硝化纖維濾膜,以鉛筆在邊緣標(biāo)上組別。
◆ 請(qǐng)戴手套后再拿取濾膜!
3) 打開培養(yǎng)皿蓋子,以兩支扁平鑷子將濾膜兩邊夾住,輕輕覆蓋在菌落上方,盡可能避免有氣泡產(chǎn)生。
◆ 注意!濾膜覆蓋上去后就不要再移動(dòng)!
4) 等濾膜*濕透后,以針頭在濾膜邊緣戳洞做記號(hào) (至少做三個(gè)記號(hào))。 小心把濾膜掀起,菌落朝上放置在LB/Amp/IPTG/X-Gluc plate 上。蓋上蓋子,在37℃培養(yǎng),若轉(zhuǎn)形株帶有接上gus 的質(zhì)體,菌落應(yīng)在1~2 h 內(nèi)轉(zhuǎn)呈藍(lán)色。原培養(yǎng)皿則置回37℃使菌落再長(zhǎng)出。
5) 將濾膜與原培養(yǎng)皿對(duì)照,標(biāo)出有藍(lán)色菌落位置。 選取數(shù)個(gè)菌落,以劃單一菌落的方式分別接種在LB/Amp/plate 上,置37℃直至菌落長(zhǎng)出。 亦同時(shí)接種于3 mL LB/Amp 培養(yǎng)液,于37℃震蕩培養(yǎng)過夜,以抽取質(zhì)體,進(jìn)行限制酶分析。
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