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DNA純化實驗

時間:2016-1-5閱讀:189
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DNA純化可以:(1)獲得高純度的DNA;(2)濃縮DNA;(3)用于測序、遺傳信息分析等分子生物學應用。

實驗步驟

 

一、試劑盒組成、貯存、穩(wěn)定性 
 

1.  說明書,耗材:96孔DNA制備板,96孔1.6 ml深孔板,96孔V型底板。
 

2.  Buffer PCR-A:DNA結合溶液。室溫密閉貯存。若出現(xiàn)沉淀,應于65°C溫浴溶解并冷卻至室溫后再使用。
 

3.  Buffer W2 concentrate:去鹽液。使用前,根據(jù)瓶上的體積加入乙醇,混合均勻,室溫密閉貯存??捎?乙醇或95%無水乙醇。
 

4.  Eluent:2.5 mM Tris-HCl,pH 8.5。室溫密閉貯存。
 

二、操作步驟 
 

用戶可以選擇負壓法或離心法。
 

A. 負壓法
 

1A.  正確連接負壓裝置,將96孔DNA制備板置于負壓裝置上;在PCR、酶切、酶標或測序反應液中,加3個體積的Buffer PCR-A(若Buffer PCR-A不足100 μl,加至100 μl);混合均勻后轉移到96孔DNA制備板中,開啟并調節(jié)負壓至-25-30英寸汞柱,緩慢吸掉板中溶液。
 

2A.  加0.3 ml Buffer W2,吸盡管中溶液。以同樣的方法再用0.3 ml Buffer W2洗滌兩次。
 

* 確認在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上的體積加入無水乙醇。
 

3A.  保持負壓將96孔DNA制備板抽吸10 min。
 

4A.  導流管朝下將96孔DNA制備板于長纖維性紙巾上用力拍擊6次。
 

.  將96孔DNA制備板置于96孔V型底板上,在膜正*加25-30 μl水或Eluent,室溫靜置1 min。≥3 000×g離心5 min洗脫DNA。
 

B. 離心法
 

1B.  在PCR、酶切、酶標或測序反應液中,加3個體積的Buffer PCR-A(若Buffer PCR-A不足100 μl,加至100 μl);混勻后,轉移到96孔DNA制備板中,將96孔DNA制備板置于96孔1.6 ml深孔板中,1 000×g離心1 min,棄濾液。
 

2B.  在96孔DNA制備板中,加0.3 ml Buffer W2,1 000×g離心1 min,棄濾液。以同樣的方法再用0.3 ml Buffer W2洗滌一次。
 

* 確認在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上的體積加入無水乙醇。
 

3B.  將96孔DNA制備板置于96孔1.6ml深孔板中,≥3 000×g離心10 min。
 

4B.  將96孔DNA制備板置于潔凈的96孔V型底板中,在膜正*加25-30 μl水或Eluent,室溫靜置1 min。≥3 000×g離心5 min洗脫DNA。

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