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上海研拓生物科技有限公司

重組DNA轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)-上海研拓

時(shí)間:2012-6-11閱讀:315
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        帶有外源DNA的片段的重組體分子在體外構(gòu)建成后,需要導(dǎo)入適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞內(nèi)進(jìn)行繁殖或表達(dá)出具有一定生物活性的蛋白。能夠作為重組體轉(zhuǎn)化的受體,主要有動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、微生物細(xì)胞等。導(dǎo)入受體細(xì)胞的途徑重要有轉(zhuǎn)化(轉(zhuǎn)染),顯微注射和電穿孔等多種不同的方式??梢愿鶕?jù)不同的受體選擇不同的導(dǎo)入方式。一般情況下,細(xì)菌一類的原核生物和酵母這樣的低等真核細(xì)胞可用轉(zhuǎn)化方式導(dǎo)入,而高等動(dòng)植物細(xì)胞則需采用顯微注射或電穿孔來進(jìn)行。

       細(xì)菌表面通過CaCl處理后,局部失去細(xì)胞壁或細(xì)胞壁溶解,DNA分子能夠通過質(zhì)膜進(jìn)入細(xì)胞。其進(jìn)入細(xì)胞的方式是完整的雙鏈DNA分子首先吸附到細(xì)胞表面,雙鏈DNA分子解鏈變成單鏈,單鏈DNA分子一條進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),另一條被降解。進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的單鏈DNA則復(fù)制成雙鏈環(huán)狀DNA,隨同復(fù)制子同時(shí)復(fù)制,并被轉(zhuǎn)錄翻譯。

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