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上海研拓生物科技有限公司

農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備

時(shí)間：2012-6-25閱讀：317
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  農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備

取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml*平板劃線，28℃培養(yǎng)。
挑取單菌落接種于5ml YM液體培養(yǎng)基中，220rpm 28℃振蕩培養(yǎng)12-16 hr。
取2ml菌液轉(zhuǎn)接于100ml YM液體培養(yǎng)基中，28℃220rpm振蕩培養(yǎng)至OD600=0.5。
轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管，5000rpm離心5min,去上清液。
加入10ml預(yù)冷的0.1M的CaCl2溶液，輕輕懸浮細(xì)胞，冰上放置20min。4℃5000rpm離心5min，去上清。
加入4ml預(yù)冷的含15%甘油的0.1M的CaCl2溶液，輕輕懸浮。
農(nóng)桿菌懸浮液分裝于無(wú)菌Eppendorf管中，每管200μl凍存于-70℃。

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