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中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門(mén)氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無(wú)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門(mén)氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

提高PCR的忠實(shí)性

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帶有校正功能的酶 

包括克隆和效率分析,PCR產(chǎn)物表達(dá)或定點(diǎn)突變?cè)趦?nèi)的PCR應(yīng)用都需要高忠實(shí)性的PCR。Taq dna聚合酶被看做是低忠實(shí)性的聚合酶,因?yàn)槠淙鄙?’到5’外切核酸酶(校正)活性。

使用帶有3’到5’外切核酸酶活性的熱穩(wěn)定聚合酶可以提高忠實(shí)性。 

但是這些聚合酶的產(chǎn)量比taq DNA聚合酶低。Platinum Pfx DNA聚合酶明顯比Taq DNA聚合酶忠實(shí)性高,而且?guī)в蠵latinum產(chǎn)品產(chǎn)量和特異性高的優(yōu)點(diǎn)(圖25)。 

使用人thrombospondin的1.1kb片段的探針對(duì)基因組DNA(泳道1到6分別為100,50,10,5,1和0ng)擴(kuò)增35個(gè)循環(huán)。A組,使用1單位Platinum Pfx Taq DNA聚合酶,在室溫配制反應(yīng)液。B組,使用2.5單PfuTurbo™ DNA聚合酶,在冰上配制反應(yīng)液。C組,使用1單位Taq DNA聚合酶,在冰上配制反應(yīng)液。 

酶混合物 

將Taq DNA聚合酶同帶有3’到5’外切核酸酶活性第二種聚合酶混合在一起可以獲得比單獨(dú)Taq DNA聚合酶高的忠實(shí)性,并可以得到高產(chǎn)量及擴(kuò)增長(zhǎng)模板。Gibco BRL高保真酶混合物,Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity忠實(shí)性是單獨(dú)Taq DNA聚合酶的6倍,并可以zui高擴(kuò)增到12kb。 

其他參數(shù) 
除了酶,高濃度的dNTP或鎂離子會(huì)降低忠實(shí)性。將dNTP的濃度從200μM降低到25-50μM可以增加度。如果四種核苷的濃度不同,忠實(shí)性會(huì)受影響。進(jìn)行較少的PCR循環(huán)也會(huì)有助于增加忠實(shí)性,因?yàn)樵黾友h(huán)數(shù)目和產(chǎn)物長(zhǎng)度就會(huì)增加突變可能性。

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