Rosetta Chemically Competent Cell 產(chǎn)品說明書
產(chǎn)品規(guī)格
Rosetta: 10×100μl
pUC19(control vector):10pg/μl 10μl
保存條件:-80℃
基因型
F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE(argU,argW,ileX,glyT,leuW,proL)(CamR)
產(chǎn)品說明
Rosetta 感受態(tài)細胞具有抗性,補充大腸桿菌缺乏的6 種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA,CCC, GGA) 對應的tRNA,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達水平,該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶),經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高達108cfu/μg。
操作方法
1. 取100μl冰上融化的Rosetta感受態(tài)細胞,加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200rpm復蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT 或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞在冰上融化。
2. 混入質(zhì)粒時應輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳獪p少終用于涂板的菌量。