馬伊氏錐蟲酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：馬伊氏錐蟲酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于定性測定馬血清，血漿及相關(guān)液體樣本中伊氏錐蟲。
實驗原理
本試劑盒采用間接法測定標本中馬伊氏錐蟲。用純化的伊氏錐蟲抗體包被微孔板，制成固相抗體，與樣品中伊氏錐蟲溫育后，加入標記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中馬伊氏錐蟲的存在與否。
試劑盒組成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 50ml×1瓶 | 8 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 |
2 | 鏈霉親和素-HRP | 6ml×1瓶 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 10 | 陽性對照 | 0.5ml×1瓶 |
4 | 標記的抗-IgG抗體 | 6ml×1瓶 | 11 | 密封袋 | 1個 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 12 | 封板膜 | 3張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 13 | 說明書 | 1份 |
7 | 終止液 | 6ml×1瓶 | | | |
標本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作步驟
1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照（不加樣品，標記的抗-IgG抗體，鏈霉親和素-HRP，其余操作相同）1孔
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，37℃溫育45分鐘。
3. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)4次，拍干。
5. 加標記的抗-IgG抗體：每孔加入標記的抗-IgG抗體50μl（空白孔除外）。37℃溫育30分鐘
6. 洗滌：操作同4。
7. 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP（空白孔除外），輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
8. 洗滌：操作同4。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
結(jié)果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為馬伊氏錐蟲陰性
陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為馬伊氏錐蟲陽性
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。
規(guī)格：
96人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
