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細胞分離試劑
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士鋒動物肝臟中DNA的制備

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一、實驗目的:
學習并掌握動物組織總dna的提取方法及其原理。

二、實驗原理:
要獲得純的DNA樣品,必須考慮以下幾點:
??如何選材,如何破碎組織細胞?
??如何除去蛋白質(zhì)?在真核細胞內(nèi),DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成核蛋白的形式存在。因此,分離DNA時必須使其與蛋白質(zhì)解離,并除去蛋白質(zhì)。
??設(shè)法除去RNA的污染;
??防止dna酶的降解作用;

(一)選材
要提取動物組織DNA,一般選擇細胞膜較脆弱,容易破碎的動物臟器,如胸腺、肝臟、脾臟、胰臟、精子等。

(二)細胞破碎方法—機械物理法:
•研磨:將剪碎的動物組織置于研缽或勻漿器中,加入少量石英砂研磨或勻漿,破碎細胞。這種方法溫和,適合實驗室使用。
•組織搗碎器:較劇烈的破碎細胞的方法,為了防止發(fā)熱和升溫過高,通常是轉(zhuǎn)10秒—20秒,停10秒—20秒,可反復多次。
•壓榨法:在1000×105Pa—2000×105Pa 的高壓下使幾十毫升的細胞懸液通過一個小孔突然釋放至常壓,細胞將*破碎。溫和的、*破碎細胞的方法,但儀器費用較高。(少量細少量細胞可用French press,大量可用Manto-gaulin
•反復凍融法:將待破碎的細胞冷至-15℃到-20℃,然后放于室溫(或40℃)迅速融化,由于細胞內(nèi)形成冰粒使剩余胞液的鹽濃度增高而引起細胞溶脹破碎。
•超聲波處理法:借助超聲波的振動力破碎細胞壁和細胞器。使用時注意降溫,防止過熱。
•冷熱交替法:在90℃左右維持數(shù)分鐘,立即放入冰浴中使之冷卻,如此反復多次,絕大部分細胞可以被破碎。
組織搗碎勻漿機

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